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cyy8332

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光定量PCR 已有2人参与

请问有用酵母菌业做荧光定量PCR的吗?我是新手，对这方面不太懂，之前做了一次，但是溶解曲线是多个峰有正峰，也有负峰，请问这是为什么？谢谢各位了
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努力追求我心里想要的！
1楼 2014-07-06 15:43:42
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eagles123

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
多个峰就是产物不纯。
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2楼2014-07-06 18:33:25
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beautybanana

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
以菌液为模板做定量PCR? 一般以菌液为模板, 可能能做PCR, 但荧光定量PCR可能不适合, 菌液的成分有可能会对荧光物质产生影响, 你最好把DNA先提取再做定量PCR, 不过要求为特异性扩增, 即只扩增目的片段, 这样溶解曲线才是一个单峰. 先做个普通PCR看你的引物是不是进行了特异性扩增, 即是否为一条目标电泳条带.
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3楼2014-07-06 23:42:00
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cyy8332

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by eagles123 at 2014-07-06 18:33:25
多个峰就是产物不纯。

谢谢您，但是引物是特异性扩增目的基因的，还可能有其他原因吗？
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努力追求我心里想要的！
4楼2014-07-07 09:44:22
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cyy8332

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by beautybanana at 2014-07-06 23:42:00
以菌液为模板做定量PCR? 一般以菌液为模板, 可能能做PCR, 但荧光定量PCR可能不适合, 菌液的成分有可能会对荧光物质产生影响, 你最好把DNA先提取再做定量PCR, 不过要求为特异性扩增, 即只扩增目的片段, 这样溶解曲线 ...

谢谢了，老师是为了节约成本，想试试看用菌液做可不可以，引物是特异性扩增的
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努力追求我心里想要的！
5楼2014-07-07 09:45:29
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eagles123

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提个DNA不要什么成本啊。 就像楼上说的 先提DNA做 如果还有多个溶解峰就要重新设计引物
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6楼2014-07-07 12:26:25
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