应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » southern杂交--以含有探针的质粒杂交，为什么能杂出两条带。
101/1返回列表
查看: 3228  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tewithte

新虫 (初入文坛)

[求助] southern杂交--以含有探针的质粒杂交，为什么能杂出两条带。 已有1人参与

杂交是使用了含有探针序列的质粒进行杂交对比，质粒和探针上都是应该没有酶切位点的，但是杂出了两条带，而且有一条特别亮，位置大约在500-1000bp左右，是不是浓度很高的DNA也可以非特异性杂交上？用的是罗氏DIG试剂盒。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-01 22:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingbing2001

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-02 12:26:37
gyesang: 应助指数+1 2014-07-15 22:24:50
你给的信息太少，不知道该怎么帮你。
既然用质粒杂交，应该考虑到质粒的三种不同形态，可能位置会不同，可以考虑用酶切后的质粒杂交。
不知道能否解决你的问题。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2014-07-02 08:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)
你好，你这个问题很明显，如果是质粒与探针进行杂交的话，会出现3条带，线性、环形和开环的三个结构。如果是酶切好的，应该会出现一条带，但是你的酶切质粒是否纯化？如果纯化不干净，还会有这样的情况。过几天我会讲一个视频来说一下southern，各种各样的问题都会在里面讲，我经常做分子杂交。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2014-07-29 02:15:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆龙9052

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wopopwz123 at 2014-07-29 02:15:31
你好，你这个问题很明显，如果是质粒与探针进行杂交的话，会出现3条带，线性、环形和开环的三个结构。如果是酶切好的，应该会出现一条带，但是你的酶切质粒是否纯化？如果纯化不干净，还会有这样的情况。过几天我会 ...

我做的是斑点杂交，探针用的是随机引物法，也是用罗氏的kit I ，用构建的质粒PCR产物来标记，目的片段为689bp左右，后来做了很多次都是只能检测到质粒，阳性样品无法检测到，愁苦~~
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-30 10:00:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bxyoung

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wopopwz123 at 2014-07-29 02:15:31
你好，你这个问题很明显，如果是质粒与探针进行杂交的话，会出现3条带，线性、环形和开环的三个结构。如果是酶切好的，应该会出现一条带，但是你的酶切质粒是否纯化？如果纯化不干净，还会有这样的情况。过几天我会 ...

请教一下，我们最近做suothern一直是样品杂不出带，阳性能杂出，我们一直怀疑是酶切不够好，我们用的是：DNA20ug，酶1/10总体积，buffer1/10总体积，ddH2O补齐500ul。请问你的酶切体系是怎么样的？还有你的探针是随机标记的还是PCR标记的？
赞一下 回复此楼
天道酬勤
5楼2014-10-20 09:16:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bxyoung at 2014-10-20 09:16:05
请教一下，我们最近做suothern一直是样品杂不出带，阳性能杂出，我们一直怀疑是酶切不够好，我们用的是：DNA20ug，酶1/10总体积，buffer1/10总体积，ddH2O补齐500ul。请问你的酶切体系是怎么样的？还有你的探针是随 ...

你邮箱是多少，我给你发一个过程资料
赞一下 回复此楼
6楼2014-10-20 13:47:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bxyoung

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wopopwz123 at 2014-10-20 13:47:52
你邮箱是多少，我给你发一个过程资料...

好的，谢谢！bxyoung@163.com
赞一下 回复此楼
天道酬勤
7楼2014-10-21 10:18:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

PerfectAngel

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wopopwz123 at 2014-07-29 02:15:31
你好，你这个问题很明显，如果是质粒与探针进行杂交的话，会出现3条带，线性、环形和开环的三个结构。如果是酶切好的，应该会出现一条带，但是你的酶切质粒是否纯化？如果纯化不干净，还会有这样的情况。过几天我会 ...

你好，我想问一下，做探针时必须得用质粒吗？还有就是探针做好后要怎么保存呢？第一次做，以前实验室也没有人做过，急死了。。。。
赞一下 回复此楼
8楼2015-04-09 15:18:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by PerfectAngel at 2015-04-09 15:18:16
你好，我想问一下，做探针时必须得用质粒吗？还有就是探针做好后要怎么保存呢？第一次做，以前实验室也没有人做过，急死了。。。。...

哦 你们探针才用什么方法进行合成的？PC还是化学反应法。我QQ2712209254有问题可以咨询我
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-09 22:31:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白日做梦123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 豆豆龙9052 at 2014-07-30 10:00:07
我做的是斑点杂交，探针用的是随机引物法，也是用罗氏的kit I ，用构建的质粒PCR产物来标记，目的片段为689bp左右，后来做了很多次都是只能检测到质粒，阳性样品无法检测到，愁苦~~...

我也是这种情况 请问你的问题解决了吗
赞一下 回复此楼
10楼2015-06-21 09:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tewithte 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 18/900 2026-08-21 13:46 by 医学老男孩
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +5 chengyan1220 2026-08-21 5/250 2026-08-21 12:34 by gltch
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 18/900 2026-08-21 11:53 by wuchongjun
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭