24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tewithte

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 13.5
帖子: 6
在线: 2.9小时
虫号: 2225336
注册: 2013-01-06

[求助] southern杂交--以含有探针的质粒杂交，为什么能杂出两条带。已有1人参与

杂交是使用了含有探针序列的质粒进行杂交对比，质粒和探针上都是应该没有酶切位点的，但是杂出了两条带，而且有一条特别亮，位置大约在500-1000bp左右，是不是浓度很高的DNA也可以非特异性杂交上？用的是罗氏DIG试剂盒。。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2014-07-01 22:24:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

bxyoung

金虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 2066.7
帖子: 65
在线: 176.5小时
虫号: 1502432
注册: 2011-11-21
性别: GG
专业: 生物物理、生物化学与分子

引用回帖:

3楼: Originally posted by wopopwz123 at 2014-07-29 02:15:31
你好，你这个问题很明显，如果是质粒与探针进行杂交的话，会出现3条带，线性、环形和开环的三个结构。如果是酶切好的，应该会出现一条带，但是你的酶切质粒是否纯化？如果纯化不干净，还会有这样的情况。过几天我会 ...

请教一下，我们最近做suothern一直是样品杂不出带，阳性能杂出，我们一直怀疑是酶切不够好，我们用的是：DNA20ug，酶1/10总体积，buffer1/10总体积，ddH2O补齐500ul。请问你的酶切体系是怎么样的？还有你的探针是随机标记的还是PCR标记的？