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tewithte

新虫 (初入文坛)

[求助] southern杂交--以含有探针的质粒杂交,为什么能杂出两条带。 已有1人参与

杂交是使用了含有探针序列的质粒进行杂交对比,质粒和探针上都是应该没有酶切位点的,但是杂出了两条带,而且有一条特别亮,位置大约在500-1000bp左右,是不是浓度很高的DNA也可以非特异性杂交上?用的是罗氏DIG试剂盒。。
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豆豆龙9052

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wopopwz123 at 2014-07-29 02:15:31
你好,你这个问题很明显,如果是质粒与探针进行杂交的话,会出现3条带,线性、环形和开环的三个结构。如果是酶切好的,应该会出现一条带,但是你的酶切质粒是否纯化?如果纯化不干净,还会有这样的情况。过几天我会 ...

我做的是斑点杂交,探针用的是随机引物法,也是用罗氏的kit I ,用构建的质粒PCR产物来标记,目的片段为689bp左右,后来做了很多次都是只能检测到质粒,阳性样品无法检测到,愁苦~~
4楼2014-07-30 10:00:07
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