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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 林学 » 蒽酮-硫酸法测淀粉、可溶性糖、蔗糖、果糖实验原理及方法
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在水一方yan

金虫 (正式写手)

这里牛人太多，只叹没有那么多

[求助] 蒽酮-硫酸法测淀粉、可溶性糖、蔗糖、果糖实验原理及方法 已有2人参与

最近在做植物非结构性碳水化合物测定的实验。具体要测淀粉、可溶性糖、蔗糖、果糖这些指标，但是各个指标的测定原理不清楚，在实验过程中不知道那些步骤是关键步骤，求大神指教！另外，该法在比色时相当于拿浓硫酸在比色，危险系数较高、操作起来速度很慢，大家有没有比较好的方法可以提供？
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我是一只小小虫、、、、、、、、、、
1楼 2014-06-15 10:12:52
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lonerice

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水稻生理学专家

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
木虫/panda: 金币+3, 辛苦 2014-06-16 23:21:22
NSC和浓硫酸反应会生成 糠醛，绿色物质，能够在620nm下具有吸收峰值。详细的原理，你可以看随便一本生理生化实验指导都会有的。
哎，为什么大家都不看书呢？

用浓硫酸也没有那么危险，自己在操作的时候小心谨慎一点就可以了。
个人认为蒽酮硫酸方法还是比较方便，快捷和稳定的。提取的时候稍微有一点繁琐而已。

行动起来，做预备实验吧。
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2楼2014-06-15 11:04:50
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在水一方yan

金虫 (正式写手)

这里牛人太多，只叹没有那么多

引用回帖:
7楼: Originally posted by lonerice at 2014-06-19 14:50:01
颗粒物质？你用的什么方法？什么植物样品？干样还是鲜样？
1、是不是蒽酮硫酸的 的配比不对，蒽酮太多了，一般用0.2000g蒽酮，溶于100ml浓硫酸。这个不会有问题。
2、你的可溶性糖提取过程中要经过好几步的纯化和 ...

谢谢，已经找到原因了，是蒽酮的问题。之前配蒽酮试剂一直用的是浓硫酸，浓度太高，将有机物碳化了，后面用了80%的硫酸配蒽酮试剂，就一切正常了！
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我是一只小小虫、、、、、、、、、、
8楼2014-06-20 15:22:39
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lonerice

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水稻生理学专家
引用回帖:
10楼: Originally posted by 在水一方yan at 2014-06-25 10:10:38
恩？蒽酮试剂是用98%的浓硫酸配的么？...

是的。我测定过 几万份的可溶性糖 和 淀粉，也没有看到在 显色过程中 蒽酮被炭化，很奇怪的现象。
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11楼2014-06-25 13:59:05
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lonerice

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水稻生理学专家
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12楼: Originally posted by 在水一方yan at 2014-08-11 22:31:30
我用浓硫酸配蒽酮时将蒽酮试剂放在磁力搅拌器上搅拌在半小时内就能明显的看到颜色从淡黄色慢慢变深，然后黄色开始发暗，再后面会发黑，猜测是有机物被碳化了...

根本用不了半小时，配置硫酸恩同试剂，浓硫酸倒入以后用玻棒搅几圈，让蒽酮均匀分布在浓硫酸里，然后等个5分钟以后会自动溶解，把沾到壁上蒽酮都溶解在硫酸里即可显色加样。蒽酮都是要避光保存的。
在等待溶解那几分钟 都要放在柜子里避光溶解，你竟然还在磁力搅拌器上弄半个小时肯定废了。
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13楼2014-08-12 08:34:15
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lonerice

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水稻生理学专家
废了是因为，蒽酮分解了，但不是被碳化。
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14楼2014-08-12 08:35:50
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在水一方yan

金虫 (正式写手)

这里牛人太多，只叹没有那么多

做了一轮预实验，最后的数据特别不好。是参照实验室以前师兄的方法做的，步骤讲的不是很详细。在控温和控时上完全没注意。最后琢磨了一下还是没有弄懂原理，各种糖类与浓硫酸反应的环境条件不同，弄清楚各种糖的反应条件，再加以严格控制，应该是能做好的。
谢谢，会找相应的实验指导书参考的！
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3楼2014-06-15 19:35:39
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在水一方yan

金虫 (正式写手)

这里牛人太多，只叹没有那么多

引用回帖:
2楼: Originally posted by lonerice at 2014-06-15 11:04:50
NSC和浓硫酸反应会生成 糠醛，绿色物质，能够在620nm下具有吸收峰值。详细的原理，你可以看随便一本生理生化实验指导都会有的。
哎，为什么大家都不看书呢？

用浓硫酸也没有那么危险，自己在操作的时候小心谨慎 ...

做了一轮预实验，最后的数据特别不好。是参照实验室以前师兄的方法做的，步骤讲的不是很详细。在控温和控时上完全没注意。最后琢磨了一下还是没有弄懂原理，各种糖类与浓硫酸反应的环境条件不同，弄清楚各种糖的反应条件，再加以严格控制，应该是能做好的。
谢谢，会找相应的实验指导书参考的！
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4楼2014-06-15 19:37:25
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尹祥杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个方法已经很精典了，很稳定很好用。你就按照步骤做吧，浓硫酸弄的时候小心点就行。
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众浪大化中，不喜也不惧。
5楼2014-06-16 21:51:04
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在水一方yan

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这里牛人太多，只叹没有那么多

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2楼: Originally posted by lonerice at 2014-06-15 11:04:50
NSC和浓硫酸反应会生成 糠醛，绿色物质，能够在620nm下具有吸收峰值。详细的原理，你可以看随便一本生理生化实验指导都会有的。
哎，为什么大家都不看书呢？

用浓硫酸也没有那么危险，自己在操作的时候小心谨慎 ...

你好，我在比色过程中样液会出现颗粒状物质，标曲0号样也是，而且越久颗粒越多，请问是蒽酮析出吗？这个要如何避免？
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6楼2014-06-18 18:33:11
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lonerice

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水稻生理学专家

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
在水一方yan: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-20 15:23:00
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6楼: Originally posted by 在水一方yan at 2014-06-18 18:33:11
你好，我在比色过程中样液会出现颗粒状物质，标曲0号样也是，而且越久颗粒越多，请问是蒽酮析出吗？这个要如何避免？...

颗粒物质？你用的什么方法？什么植物样品？干样还是鲜样？
1、是不是蒽酮硫酸的 的配比不对，蒽酮太多了，一般用0.2000g蒽酮，溶于100ml浓硫酸。这个不会有问题。
2、你的可溶性糖提取过程中要经过好几步的纯化和离心，你的提取液有没有经过滤纸过滤，里边是不是有杂质。
3、不知道你用的是具体哪种方法，蒽酮硫酸在显色的时候有一个加热的过程，温度是否适宜？
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7楼2014-06-19 14:50:01
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lonerice

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水稻生理学专家
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8楼: Originally posted by 在水一方yan at 2014-06-20 15:22:39
谢谢，已经找到原因了，是蒽酮的问题。之前配蒽酮试剂一直用的是浓硫酸，浓度太高，将有机物碳化了，后面用了80%的硫酸配蒽酮试剂，就一切正常了！...

找到问题所在就好。
我倒有个问题，浓硫酸怎么会炭化蒽酮呢。蒽酮的熔点在700度以上，一个蒽酮分子只有一个氧原子，怎么脱去 那么多的H呢。不太明白……
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9楼2014-06-20 22:09:56
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9楼: Originally posted by lonerice at 2014-06-20 22:09:56
找到问题所在就好。
我倒有个问题，浓硫酸怎么会炭化蒽酮呢。蒽酮的熔点在700度以上，一个蒽酮分子只有一个氧原子，怎么脱去 那么多的H呢。不太明白……...

恩？蒽酮试剂是用98%的浓硫酸配的么？
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10楼2014-06-25 10:10:38
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