| 查看: 3507 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
目的片段加上GFP标签 已有2人参与
|
||
| 贵大侠： 目前在构建融合蛋白，clta +GFP,用的载体pEGFP-n2,双酶切位点为Ecor1和kpn1，双酶切之后，回收产物没有问题，可是一直连不上，转化有单克隆，可是菌液pcr一直没有结果，没有任何条带，急啊！求指导~ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有287人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 各类重组蛋白表达载体常用标签综述
已经有139人回复
- 引物设计实例分析
已经有10人回复
- 有人做过双报告基因的过表达质粒载体么？
已经有5人回复
- 利用PET-28b构建重组载体时将目的基因插在lac I基因中的酶切位点可以么
已经有4人回复
- 求助荧光纳米颗粒标记免疫分析实验 谢谢
已经有8人回复
- 带his标签的GFP质粒，能买到吗？
已经有3人回复
- 关于PCR引物中加入酶切位点的设计方法和酶切问题！ 新手，求帮忙！！
已经有4人回复
- 带GFP的重组表达载体，GFP蛋白会不会影响目的基因表达的蛋白？
已经有20人回复
- 目的蛋白加myc或his标签？
已经有10人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
wopopwz123
捐助贵宾 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3272
- 红花: 27
- 帖子: 214
- 在线: 86.8小时
- 虫号: 862123
- 注册: 2009-10-03
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-07-28 16:25:56
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-07-28 16:25:56
|
一般这样的问题，有一下几个情况： 第一，你是用PCR产物直接酶切的？还是扩增片段链接T载体以后送测序以后再酶切的？ 如果你是PCR产物直接做酶切的，可能切不下来或是酶切不完全，你连接以后转化到感受态中，可能会出现载体自连接。如果你是从载体上酶切的，基本上没有这样的问题。 第二，你说你酶切能切下来，但是PCR检测没有条带？ 你的退火温度是多少？ 我建议你用60度试试，我做融合表达的时候，GFP的温度就是60度。 |
sky-飞翔3楼2014-07-28 13:25:22
2楼2014-07-28 11:04:49
4楼2014-07-28 16:03:23
5楼2014-07-28 16:05:21
30