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RED重组敲除BL21(DE3)
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caoweijia
木虫
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散金: 10
帖子: 63
在线: 81.4小时
虫号: 1654975
注册: 2012-03-01
专业: 生物化学
[
求助
]
RED重组敲除BL21(DE3)
已有2人参与
敲除的基因对菌株生长无影响,我设计的同源臂为1000bp,但是重组不上,B系列的菌株该如何提高重组效率,求教!!!
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2014-05-29 13:07:26
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bolysu
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2014-07-29 11:08:12
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朱多龙
木虫
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帖子: 221
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虫号: 2055828
注册: 2012-10-12
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流!
2014-05-29 13:24:31
大肠杆菌的基因敲除相对很容易了。大肠杆菌重组的同源臂一般不需要那么长,左右两端个500bp足够了,太长会增加非特异重组。关于效率的问题,最好按照文献作者的方法去做。还有就是关于Red系统,控制好温度。
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2楼
2014-05-29 13:18:19
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3楼
2014-07-28 19:18:28
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小苹果168
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虫号: 3343545
注册: 2014-07-29
专业: 细胞生物学
【答案】应助回帖
引用回帖:
3楼
:
Originally posted by
bolysu
at 2014-07-28 19:18:28
您好,请问你的BL21 DE3敲除成功了吗?辅助质粒怎么导进去的啊?为什么我的质粒导不进去啊
你用的什么方法转的
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4楼
2014-07-29 09:17:07
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