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jinyanyan

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 54.4
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虫号: 1272035
注册: 2011-04-20
性别: MM
专业: 蛋白质组学

[交流] His 抗体识别组氨酸个数已有2人参与

我的蛋白不带标签，本身就有HHHXH的序列，可以结合Ni柱，咪唑梯度下下来后有两条带，并且大小相差不大，不能确定哪一条是我的蛋白，有什么办法吗？如果用His抗体去做western的话能区分出我的蛋白和杂带吗？

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1楼 2014-05-26 10:47:22

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antibodyknow

铜虫 (初入文坛)

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专业: 抗体工程学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

关键是你如何确定拟的目的蛋白一定能结合到Ni柱上的？
你是在什么系统中表达你的目的蛋白？（E.coli,yeast, HEK293..)
最好先用你的目的蛋白特异的抗体进行western blot确认你自己的目的蛋白，可能两条都是（翻译后修饰的差别），也可能两条都不是。

2楼2014-05-26 12:45:31

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一步一步

木虫 (著名写手)

应助: 35 (小学生)
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红花: 5
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在线: 216.2小时
虫号: 769328
注册: 2009-05-13

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

有的His抗体能够识别6xHis-, 5xHis-, and 4xHis-tags.楼主的是HHHXH感觉应该是可以的。楼主可以拿His 抗体试试。祝你好运哈。

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3楼2014-05-28 13:00:25

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