24小时热门版块排行榜    

查看: 2758  |  回复: 20

lilili25

金虫 (初入文坛)

[求助] 肠道内微生物DNA提取后,PCR却无结果 已有13人参与

我用试剂盒提取的肠道微生物的DNA,浓度为120ng/ul ,纯度为1.700,但是16s PCR 却没有产物,我用的是细菌通用引物,27f和1492r.模板也进行了稀释,都没有结果。是什么原因?请大家帮帮忙?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

启动子2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

27f和1492r通用引物PCR产物在1.5kb左右,所以你的PCR extension time要1.5分钟以上(用Taq酶的话),一般我们用2分钟。我刚做这个的时候就犯了这样的错误。
通往表达的启动子。
13楼2014-06-02 15:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happy6

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做个梯度PCR看一下,建议你先用模版做梯度,然后再考虑其他成分。
2楼2014-05-19 08:56:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以先用C3-V5或者其它的,稍微短一些的片段扩增。另外,你的DNA不知道会不会太浓了,稀释十倍试试。
致良知
3楼2014-05-19 10:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做没有阳性对照和阴性对照?会不是是体系和试剂的问题?
排出了试剂的问题,再考虑样品的问题。
环境卫生、微生物学、卫生应急
4楼2014-05-19 12:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用338f和519r试试,短片段就出来了
ControlMyself
5楼2014-05-19 15:37:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lgn07521

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA纯度不好吧? 我PCR之前测DNA纯度都在1.77到1.83之间时感觉比较好! 还有是不是酶失活了?或者,体系有问题,有时候引物加的量也会引起PCR反应没结果的,总之原因很多,具体要自己摸一套适合自己的体系!
6楼2014-05-19 18:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议做个梯度或者采样降落PCR程序扩增,这只有慢慢摸索了
但行好事,莫问前程
7楼2014-05-20 19:42:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板,体系,退火温度,循环设置,各种的都有影响,把你做的体系详细列出来,包括PCR程序,一分析便知。
8楼2014-05-20 20:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果短片段出来了,考虑一下pcr体系的问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
修炼ing,当虫仙……
9楼2014-05-21 09:03:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板稀释10倍试试看

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2014-05-21 20:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilili25

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by xiangchou812 at 2014-05-21 20:36:19
模板稀释10倍试试看

我已经做了梯度PCR
11楼2014-05-22 07:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by lilili25 at 2014-05-22 07:43:24
我已经做了梯度PCR...

一般我们讲的梯度PCR专指温度梯度吧?
12楼2014-05-22 09:04:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongzhen

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by lilili25 at 2014-08-19 16:31:45
我用的gc338f和518r的引物P小片段,也没有!我在用试剂盒提DNA时把肠道组织也放进去了。这有没有可能是把肠道组织的DNA提取出来。...

应该不会。楼主,你这个问题解决了没有?我也有这样的问题,我做了阳性对照,排除了PCR体系的问题,但是模板也不知道有什么问题,都是照说明书提的DNA啊。你用的是什么试剂盒啊?
16楼2014-12-24 20:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wadecao

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

17楼2015-01-04 13:46:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifehuangwei

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是你的基因大部分是宿主的基因~所以很难p
18楼2015-10-28 16:48:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lilili25 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +4 majunge000 2026-08-10 4/200 2026-08-12 15:46 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见