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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 肠道内微生物DNA提取后，PCR却无结果
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lilili25

金虫 (初入文坛)

[求助] 肠道内微生物DNA提取后，PCR却无结果 已有13人参与

我用试剂盒提取的肠道微生物的DNA，浓度为120ng/ul ，纯度为1.700，但是16s PCR 却没有产物，我用的是细菌通用引物，27f和1492r.模板也进行了稀释，都没有结果。是什么原因？请大家帮帮忙？
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1楼 2014-05-19 08:00:03
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zhongzhen

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by lilili25 at 2014-08-19 16:31:45
我用的gc338f和518r的引物P小片段，也没有！我在用试剂盒提DNA时把肠道组织也放进去了。这有没有可能是把肠道组织的DNA提取出来。...

应该不会。楼主，你这个问题解决了没有？我也有这样的问题，我做了阳性对照，排除了PCR体系的问题，但是模板也不知道有什么问题，都是照说明书提的DNA啊。你用的是什么试剂盒啊？
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16楼2014-12-24 20:54:08
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happy6

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做个梯度PCR看一下，建议你先用模版做梯度，然后再考虑其他成分。
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2楼2014-05-19 08:56:38
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以先用C3-V5或者其它的，稍微短一些的片段扩增。另外，你的DNA不知道会不会太浓了，稀释十倍试试。
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致良知
3楼2014-05-19 10:26:20
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做没有阳性对照和阴性对照？会不是是体系和试剂的问题？
排出了试剂的问题，再考虑样品的问题。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
4楼2014-05-19 12:37:54
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