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lilili25

金虫 (初入文坛)

[求助] 肠道内微生物DNA提取后,PCR却无结果 已有13人参与

我用试剂盒提取的肠道微生物的DNA,浓度为120ng/ul ,纯度为1.700,但是16s PCR 却没有产物,我用的是细菌通用引物,27f和1492r.模板也进行了稀释,都没有结果。是什么原因?请大家帮帮忙?
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启动子2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

27f和1492r通用引物PCR产物在1.5kb左右,所以你的PCR extension time要1.5分钟以上(用Taq酶的话),一般我们用2分钟。我刚做这个的时候就犯了这样的错误。
通往表达的启动子。
13楼2014-06-02 15:55:44
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happy6

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做个梯度PCR看一下,建议你先用模版做梯度,然后再考虑其他成分。
2楼2014-05-19 08:56:38
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以先用C3-V5或者其它的,稍微短一些的片段扩增。另外,你的DNA不知道会不会太浓了,稀释十倍试试。
致良知
3楼2014-05-19 10:26:20
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做没有阳性对照和阴性对照?会不是是体系和试剂的问题?
排出了试剂的问题,再考虑样品的问题。
环境卫生、微生物学、卫生应急
4楼2014-05-19 12:37:54
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