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lilili25

金虫 (初入文坛)

[求助] 肠道内微生物DNA提取后,PCR却无结果 已有13人参与

我用试剂盒提取的肠道微生物的DNA,浓度为120ng/ul ,纯度为1.700,但是16s PCR 却没有产物,我用的是细菌通用引物,27f和1492r.模板也进行了稀释,都没有结果。是什么原因?请大家帮帮忙?
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lgn07521

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA纯度不好吧? 我PCR之前测DNA纯度都在1.77到1.83之间时感觉比较好! 还有是不是酶失活了?或者,体系有问题,有时候引物加的量也会引起PCR反应没结果的,总之原因很多,具体要自己摸一套适合自己的体系!
6楼2014-05-19 18:42:49
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happy6

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做个梯度PCR看一下,建议你先用模版做梯度,然后再考虑其他成分。
2楼2014-05-19 08:56:38
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以先用C3-V5或者其它的,稍微短一些的片段扩增。另外,你的DNA不知道会不会太浓了,稀释十倍试试。
致良知
3楼2014-05-19 10:26:20
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做没有阳性对照和阴性对照?会不是是体系和试剂的问题?
排出了试剂的问题,再考虑样品的问题。
环境卫生、微生物学、卫生应急
4楼2014-05-19 12:37:54
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