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心月之星

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物DNA 的提取与纯化 已有1人参与

DNA粗提取后有很明显的条带,纯化后看不到条带,为什么 是不是说明原来DNA溶液中全是蛋白质和杂质
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1楼 2014-05-15 09:08:30
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qianhaocool

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-05-15 16:38:24
1、粗提，可能你是用的经典酚氯仿法吧。不知道你有没有加蛋白酶K，以及抽提次数，以及DNA析出的时候用的是乙醇有没有加异丙醇。
2、纯化是用的试剂盒么，还是二次沉淀？
3、如果是试剂盒的话，它对大片段的吸附能力以及洗脱能力是有限的，一般都是些短片段。粗提的DNa分子量一般都比较打，所以可能你用试剂盒纯化后的量比较少。当然还跟你的操作和盒子有关系，比如温度选择，洗脱次数等。
4、如果你是二次沉淀。不排除你提出来的DNA很大部分是蛋白质。如果加水溶解后黏糊糊的甚至是胶状，恭喜你，提出来的全是多糖。
5、顺便说一句，提多糖的方法和提DNa的酚氯仿法基本是一样的。
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2楼2014-05-15 11:29:23
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心月之星

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qianhaocool at 2014-05-15 11:29:23
1、粗提，可能你是用的经典酚氯仿法吧。不知道你有没有加蛋白酶K，以及抽提次数，以及DNA析出的时候用的是乙醇有没有加异丙醇。
2、纯化是用的试剂盒么，还是二次沉淀？
3、如果是试剂盒的话，它对大片段的吸附能 ...

我是用CTAB法提取的，沉淀DNA 时用的是无水乙醇，这跟用异丙醇沉淀有什么区别吗？
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3楼2014-05-15 16:30:00
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心月之星

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 心月之星 at 2014-05-15 16:30:00
我是用CTAB法提取的，沉淀DNA 时用的是无水乙醇，这跟用异丙醇沉淀有什么区别吗？...

另外还想问一下，沉淀DNA 时加无水乙醇能看见絮状沉淀，但加异丙醇
为什么就看不到?
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4楼2014-05-15 16:39:40
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