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用双缩脲法测定水解液中多肽含量的相关问题
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| 我最近在做双缩脲法测定水解液中多肽含量，我使用谷胱甘肽做标准曲线的，查阅相关文献发现有些说在540nm处有最大吸收波长，有些是在310nm处有最大吸收波长。。。。。。我测的是320nm处有最大吸收波长，不知道对不对，还有在测水解液中多肽浓度时测出的结果远远多出样品量，我测的方法如下：取5mL水解液(酶解液冻干后用5% TCA溶液配成4mg/ml)，加入5 mL 10% TCA溶液，于漩祸混合仪上混合均匀，静置20 min，然后在4000 r/min条件下离心5 min，然后取0.5 mL上清液，加入5% TCA溶液5.5 mL，再加入4 .0mL 双缩脲试剂（样液：双缩脲试剂=3:2，V/V），于漩祸混合仪上混合均匀，在4000 r/min条件下离心5 min，取上清液于最大吸收波长下测定吸光度值，对照标准曲线，代入回归方程，求得样品溶液中多肽浓度C（mg/mL），进而求得样品中多肽含量。紫外分光光度计上测出的上清液中多肽含量是1.161mg/ml，那么我这5ml水解中多肽含量就是（1.161*20）mg/ml，远远高于5ml水解液中样品的浓度，整来整去还是不知道怎么回事，请各位老师同学帮我分析分析，万分感谢 |
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