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用双缩脲法测定水解液中多肽含量的相关问题
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| 我最近在做双缩脲法测定水解液中多肽含量,我使用谷胱甘肽做标准曲线的,查阅相关文献发现有些说在540nm处有最大吸收波长,有些是在310nm处有最大吸收波长。。。。。。我测的是320nm处有最大吸收波长,不知道对不对,还有在测水解液中多肽浓度时测出的结果远远多出样品量,我测的方法如下:取5mL水解液(酶解液冻干后用5% TCA溶液配成4mg/ml),加入5 mL 10% TCA溶液,于漩祸混合仪上混合均匀,静置20 min,然后在4000 r/min条件下离心5 min,然后取0.5 mL上清液,加入5% TCA溶液5.5 mL,再加入4 .0mL 双缩脲试剂(样液:双缩脲试剂=3:2,V/V),于漩祸混合仪上混合均匀,在4000 r/min条件下离心5 min,取上清液于最大吸收波长下测定吸光度值,对照标准曲线,代入回归方程,求得样品溶液中多肽浓度C(mg/mL),进而求得样品中多肽含量。紫外分光光度计上测出的上清液中多肽含量是1.161mg/ml,那么我这5ml水解中多肽含量就是(1.161*20)mg/ml,远远高于5ml水解液中样品的浓度,整来整去还是不知道怎么回事,请各位老师同学帮我分析分析,万分感谢 |
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2楼2014-11-18 18:12:27
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李招9377
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