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小睿D

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质标准曲线的测定的细节 已有2人参与

各位虫友，小弟最近在做蛋白质标准曲线，但一直都做不出来，先是在595nm处出现-0.604的吸收值，还有-0.452，而且不会随蛋白质的浓度升高而吸光度变大，做光谱扫描的时候也没见在595处有吸收峰，我的实验是按网上搜到的来做的，就是做的细节可能有些和大家不同，想看看已经做出的虫友做的时候是怎么样？是不是我做错了？我觉得有问题的地方有：
1、考马斯亮蓝G-250配制的时候，在定容完后进行过滤，得到的滤液直接放入塑料瓶中，然后放入冰箱中4-5℃保存。
2、在做紫外分光光度的时候，我用塑料比色皿来做，每个样都用一个新的比色皿，没有润洗（比色皿都是一次性用）。
想了解一下大家的实验步骤是怎么样的？
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1楼 2014-01-06 14:06:57
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cyc000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2014-01-10 20:27:30
小睿D(红舟流星代发): 金币+6, 代扣代发金币 2014-04-18 09:01:26
把已知蛋白浓度逐级稀释，取0.1~0.5mg/mL的值，再大的值误差很大，出现下降趋势，G250和蛋白溶液的浓度比我用的是体积比20比1.
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2楼2014-01-10 19:21:50
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cyc000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不好意思，是19比1，之前的那个记错了！
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小睿D
3楼2014-01-10 19:33:33
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2014-01-15 21:24:01
小睿D(红舟流星代发): 金币+4, 代扣代发金币 2014-04-18 09:01:17
是不是你溶解牛血清蛋白的缓冲液里某些物质和G250反应了啊。G250不只是和蛋白反应显蓝色，和别的一些物质某些表面活性剂也反应显色的
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4楼2014-01-15 11:16:16
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
最近打算测蛋白质总含量，顺便问一下，牛血清蛋白该买哪家的？Sigma的说纯度98%，可以么？
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5楼2014-01-17 16:50:16
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小睿D

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cyc000 at 2014-01-10 19:33:33
不好意思，是19比1，之前的那个记错了！

非常感谢，那段时间又进行了不同的尝试，结果发现是考马斯亮蓝出问题，西亚公司的G250不知道是包装错了还是怎么的，我们后来换了阿拉丁的就没事了，没能及时给您回复，真的很抱歉！再次感谢您！

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6楼2014-07-18 01:08:21
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小睿D

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Ivy尘 at 2014-01-17 16:50:16
最近打算测蛋白质总含量，顺便问一下，牛血清蛋白该买哪家的？Sigma的说纯度98%，可以么？

牛血清 我用的是西亚公司的

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7楼2014-07-18 01:09:06
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小睿D

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chengjg at 2014-01-15 11:16:16
是不是你溶解牛血清蛋白的缓冲液里某些物质和G250反应了啊。G250不只是和蛋白反应显蓝色，和别的一些物质某些表面活性剂也反应显色的

这个可以排除，我们都用洗干净的仪器做的，是试剂出了些问题！谢谢你的观点！

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8楼2014-07-18 01:11:11
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