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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 质粒相关问题
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒相关问题 已有5人参与

将T载体与目的片段连接后，做阳性克隆有目的片段，但是将连接体用质粒提取试剂盒提取后，再跑电泳时，为什么最亮的条带介于T载体和目的片段之间？？不应该是载体和目的片段之和吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-05-05 23:47:12
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的DNAladder marker？不是要用超螺旋marker么
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2楼2014-05-06 10:23:55
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hathryn

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也出现过这种问题，有可能质粒不纯，而且这种分纯都分不出来的……另外最亮的条带应该比载体和目的片段之和还要大，一般质粒提出来有2-3个条带，超螺旋跑的最快，大概就是质粒本身的大小，但是比较暗，线性的最慢，所以跑出来看上去要比质粒本身大小要大很多~~
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3楼2014-05-06 11:29:47
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的T载体对照是线性的还是超螺旋的？
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4楼2014-05-06 15:24:07
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-05-06 15:24:07
你的T载体对照是线性的还是超螺旋的？

线性的啊

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-05-06 17:07:59
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
插入片段足够大才能在凝胶上看出来差别
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致良知
6楼2014-05-06 19:28:58
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 潇潇杨雨125 at 2014-05-06 17:07:59
线性的啊
...

提取质粒较亮的条带是超螺旋，和线性T载体不具有可比性；可以酶切使质粒线性化，再电泳，比较大小
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做一个阳光、开朗的小和尚
7楼2014-05-06 21:21:08
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我就是想说7楼的这个事儿，或者你用T载体自连的环形质粒做对照，否则线性和超螺旋的跑电泳无法比较大小。
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8楼2014-05-07 11:43:49
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