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jasonyuanjx

铜虫 (初入文坛)

[求助] western blot实验相关求助 已有1人参与

本人跨方向做科研,属于新手一枚,现在在学习WB实验技术,请教虫友几个问题,希望细心解答,好答案加金币:
1,SDS-PAGE分离胶浓度的选择:在实验室随便找了几个抗体,想先摸遍WB流程,熟悉方法技术,所以抗体随意选择(目前实验室有220,80,48,25分子量的蛋白抗体供选择),内参选的是GAPDH,通过查阅文献GAPDH分子量是36,我选择80的目的蛋白可以吗?如果选48的会不会和内参太近,影响结果观察。如果选80的蛋白,选择10%的分离胶好,还是12%的分离胶好?
2,分离胶浓度确定后,用多大的电压,跑多场时间为宜?
3,转膜条件怎么选择?
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cedriclin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.80的可以啊,可以与内参切开,选用10%,12%的分离胶都可以;
2.浓缩电压80-90V,分离电压110-130V都可以,通常浓缩需要半小时左右marker才会分离,分离胶再跑1小时左右吧,这个不固定,因为每个实验室的仪器,电泳缓冲液什么的都有差别;
3.湿法转膜,150mA恒流转2个小时即可
2楼2014-05-05 21:12:43
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