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nklwl

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 中温淀粉酶检测时出现沉淀? 已有3人参与

按照 《GB 8275-2009 食品添加剂 α-淀粉酶制剂》检测淀粉酶


4.1、待测酶液的制备
    称取1 g~2 g酶粉(精确0.000 1 g)或准确吸取酶液1.00 mL,用少量磷酸缓冲液(6.2.2.6)充分溶解,将上清液小心倾入容量瓶中,若有剩余残渣,再加少量磷酸缓冲液(6.2.2.6)充分研磨,最终样品全部移入容量瓶中,用磷酸缓冲液(6.2.2.6)定容至刻度,摇匀。用四层纱布过滤,滤液待用。
    注:待测中温a-淀粉酶酶液酶活力浓度控制在3.4 u/mL—4.5 u/mL范围内。
4.2、测定
    吸取20.0 mL可溶性淀粉溶液(6.2.2.5)于试管(6.2.3.4)中,加入磷酸缓冲液(6.2.2.6)5.00 mL,摇匀后,置于60℃±0.2℃恒温水浴中预热8 min。
    加入1. 00 mL稀释好的待测酶液(6.2.4.1),立即计时,摇匀,准确反应5 min。
    立即用自动移液器吸取1.00 mL反应液,加到预先盛有0.5 mL盐酸溶液(6.2.2.7)和5. 00 mL稀碘液(6.2.2.4)的试管中,摇匀,并以0.5 mL盐酸溶液和5.00 mL稀碘液为空白,于660 nm波长下,用10 mm比色皿迅速测定其吸光度(A)。根掘吸光度查附录B,求得测试酶液的浓度。
5、计算
    淀粉酶制剂的酶活力按式(1)计算:
    X1=c×n                                                         
    式中:
    X1一样品的酶活力,u/mL(或u/g);
    C一测试酶样的浓度,u/mL(或u/g);
    n一样品的稀释倍数。
    所得结果表示至整数。


检测过程中淀粉溶液加酶反应后出现悬浮液!!!
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superior111

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那个应该不是沉淀,你用的中温淀粉酶应该是市售的酶制剂吧,四层纱布过滤后静置还有沉淀可能是工业杂质,我之前也做过这方面实验,也是这样的。。。
Mol是分子生物学molecularbiology前三个字母,EPI=EmuchProfessionalIndex,即小木虫专家指数,MolEPI也就是小木虫分子生物版专家指数。
4楼2014-05-24 11:37:55
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查看全部 8 个回答

bamboo322

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我的也是,还是絮状的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-05-22 21:55:32
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 专家考核 2014-06-11 18:57:31
淀粉溶液加酶反应后不可能出现悬浮液的,和碘液显色之后静置才会出现,静置久了络合物会沉淀,离心之后会有黑色络合物沉淀和有点黄的上清液。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2014-05-23 18:28:34
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nklwl

至尊木虫 (著名写手)

不是淀粉酶的问题,主要是检测用的淀粉有问题。普通的分析淀粉纯度低,易产生絮状沉淀。
5楼2014-11-15 12:20:00
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