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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)

[求助] 有水解圈测不到酶活 已有1人参与

用刚果红染色后有很大水解圈,但发酵培养后测不到酶活。。。为什么
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dahuaidang

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 富硒贡茶 at 2014-04-26 17:10:44
是不是将没有离心的发酵液涂布在平板培养两天看有没圈...

好吧我具体的说一下:20 ml  0.8-1%的琼脂+1-2% CMC倒9cm板(不是培养基), 凝固后打几个孔, 加50-100 ul要测活的上清, 37-40度保温3h-过夜(依据酶活), 然后刚果红染色。 如果是其他多糖酶,换CMC为其他多糖。
发文章发文章,没文章没法混呀。
4楼2014-04-26 17:47:09
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dahuaidang

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
富硒贡茶: 金币+10, 有帮助 2014-04-26 16:38:49
楼主应该做的是纤维素或者其他多糖的水解酶吧?你把发酵产物做个透明圈实验看看是不是有, 没有的话, 要么没表达·或没分泌。 如果有, 不太清楚了, 先检查一下反应体系有无问题, 然后确认你的酶是不是只对长链的底物有效。
发文章发文章,没文章没法混呀。
2楼2014-04-25 11:58:32
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dahuaidang at 2014-04-25 11:58:32
楼主应该做的是纤维素或者其他多糖的水解酶吧?你把发酵产物做个透明圈实验看看是不是有, 没有的话, 要么没表达·或没分泌。 如果有, 不太清楚了, 先检查一下反应体系有无问题, 然后确认你的酶是不是只对长链的 ...

是不是将没有离心的发酵液涂布在平板培养两天看有没圈
3楼2014-04-26 17:10:44
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