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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 有水解圈测不到酶活
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)

[求助] 有水解圈测不到酶活 已有1人参与

用刚果红染色后有很大水解圈，但发酵培养后测不到酶活。。。为什么
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1楼 2014-04-25 08:47:27
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dahuaidang

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
富硒贡茶: 金币+10, ★有帮助 2014-04-26 16:38:49
楼主应该做的是纤维素或者其他多糖的水解酶吧？你把发酵产物做个透明圈实验看看是不是有， 没有的话， 要么没表达·或没分泌。 如果有， 不太清楚了， 先检查一下反应体系有无问题， 然后确认你的酶是不是只对长链的底物有效。
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发文章发文章，没文章没法混呀。
2楼2014-04-25 11:58:32
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dahuaidang at 2014-04-25 11:58:32
楼主应该做的是纤维素或者其他多糖的水解酶吧？你把发酵产物做个透明圈实验看看是不是有， 没有的话， 要么没表达·或没分泌。 如果有， 不太清楚了， 先检查一下反应体系有无问题， 然后确认你的酶是不是只对长链的 ...

是不是将没有离心的发酵液涂布在平板培养两天看有没圈
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3楼2014-04-26 17:10:44
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dahuaidang

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 富硒贡茶 at 2014-04-26 17:10:44
是不是将没有离心的发酵液涂布在平板培养两天看有没圈...

好吧我具体的说一下：20 ml  0.8-1%的琼脂+1-2% CMC倒9cm板（不是培养基）， 凝固后打几个孔， 加50-100 ul要测活的上清， 37-40度保温3h-过夜（依据酶活）， 然后刚果红染色。 如果是其他多糖酶，换CMC为其他多糖。
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发文章发文章，没文章没法混呀。
4楼2014-04-26 17:47:09
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