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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白水解酶蛋白可以做酵母双杂交吗？
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sunqx

木虫 (著名写手)

[求助] 蛋白水解酶蛋白可以做酵母双杂交吗？

大家好，
有一个问题咨询大家，
一个蛋白水解酶 和它水解的蛋白可以做酵母双杂交吗？
谢谢大家。
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1楼 2012-07-02 20:16:32
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励交流u 2012-07-05 13:46:19
楼主是打算利用Y2H筛选底物么？我怀疑水解酶和底物蛋白相互作用时间偏短，无法形成足够稳定的蛋白复合物，激活报告基因转录。
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sunqx
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-07-02 22:11:43
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sunqx

木虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-07-02 22:11:43
楼主是打算利用Y2H筛选底物么？我怀疑水解酶和底物蛋白相互作用时间偏短，无法形成足够稳定的蛋白复合物，激活报告基因转录。

谢谢你，想验证两个蛋白是否互作。
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3楼2012-07-03 11:00:46
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunqx at 2012-07-03 11:00:46
谢谢你，想验证两个蛋白是否互作。...

水解酶和对应底物蛋白应该肯定有相互作用吧，测这个有什么意义？
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4楼2012-07-03 15:45:17
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sunqx

木虫 (著名写手)
文库筛选出了一个蛋白，是个可能的 蛋白水解酶。有文章报道，我的bait蛋白却是在某条件下，消失。但是文章说是 泛素途径降解的。筛出来之后， 重新克隆，验证，不自我激发， 但有时候 能检测到两个蛋白的互作， 有时候不能够检测到 。
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5楼2012-07-04 23:32:45
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123n

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-07-05 13:46:37
蛋白水解酶和其底物蛋白，虽然能结合，但是把蛋白水解掉了，形成不了作用强烈的复合物，就不能使携带的激活域将下游基因激活，从而筛选.......
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6楼2012-07-05 09:12:11
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

最近和别人讨论了这个问题，究竟能否用Y2H测蛋白催化，值得一试。目前好像没有关于究竟作用时间需要多长才可以用Y2H检测到，对于蛋白水解，只是杂交概率变小，但应该也可以做出结果来。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
7楼2012-07-17 17:38:42
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