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wardwaads

银虫 (小有名气)

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[求助] 琼脂糖凝胶电泳：同一批样每次结果不一致，为什么?_? 已有2人参与

请大家帮我分析一下下面这三张图：
这三张图都是同一批PCR产物的，目的条带大小为400多bp，其中图4.21 是pcr结束后立即跑的；图new1 图new2 分别是隔夜后第2，3次跑的。

我自己有以下几个疑惑：
1.图4.21 中为什么目的条带是月牙形的？胶上背景不均我认为可能和没有冲洗彻底有关，或者是制胶问题？
2.图new1 同一批样品为什么完全没有显示条带？marker是有的。
3.图new2 再次跑了之后发现又有了条带，但是参差不齐，而且大部分目的条带不在400bp了，不知道是为什么？
4.另外空白样中出现了目的条带，我不认为我操作中出现了交叉污染。可能是什么原因导致呢？

另外需要说明的是，我的这些条带是通过两步法PCR做出的。即：第一次PCR后取产物加入新的体系中进行第二次PCR，然后来跑胶。因为第一次PCR产物跑胶一直跑不出来，所以我认为是由于我的模板含量在我的样本中的含量过低。

请大家帮我分析分析，谢谢～

new1.jpg

new2.jpg

4.21.jpg

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1楼 2014-04-24 00:03:47

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笑西少

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

7楼: Originally posted by wardwaads at 2014-04-28 09:40:13
谢谢你！
我的这个循环次数是比较多，经过了2次PCR，每次有35个循环。只是不知道这结果出现的条带位置不对的话，还是不是目的条带？还是出现了其他的非特异性扩增。这一点我准备拿去测序。

另外为什么同一批结 ...

对于同一批次结果不同电泳成图不一样，不知道是不是制胶的问题。两次制的胶会不会不是很一致？