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酶活测定和标准曲线 已有1人参与
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现测定有一种胞内酶（作用底物产铵根离子）的酶活，步骤如下： 绘制标准曲线：称取过夜干燥的硫酸铵0.66g，定容到100ml.也就是100mmol/L的铵根离子，然后以此为原液，配制0.5、1、1.5、2、2.5umol/mL的梯度液，取250uL的标准梯度液先在37℃放置20min，再加显色剂I和II各500uL。再在37℃放置20分钟显色。测OD，以OD为纵坐标，铵根离子为横坐标。然后做出标准曲线。 酶活测定：取1ml发酵液，缓冲液洗两次之后，再加500uL的缓冲液重悬，因底物能够进入细胞，所以可以直接测定，取10uL重悬液稀释到50uL，再加200uL过量的底物。先在37℃反应20min，再加显色剂I和II各500uL。再在37℃放置20分钟显色。测OD，然后换算酶活。 问题是：1.这样测出来的标准曲线的铵根离子的单位是umol/mL还是umol 2.换算成1ml发酵液的酶活的话该怎么换算，也就是多少U/mL，小弟最近被这个问题搞晕了，一直困惑，希望能有人指点指点，小弟不胜感激！！！ |
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