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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » pET系列的质粒怎么提？？？
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安小安4302

铁虫 (正式写手)

[求助] pET系列的质粒怎么提？？？已有10人参与

最近在提质粒，用生工试剂盒，但是pET这个载体提出的量很少，怎么办？？增加了菌量还是不行，同时提的pUCm-T就很好。求大家给点意见！！！
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不要因为走的太远，以至于忘记了为什么出发！
1楼2014-04-14 19:57:55
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
安小安4302(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-04-15 09:02:13
引用回帖:
5楼: Originally posted by 安小安4302 at 2014-04-14 21:02:53
就是用的碱裂解呀，用生工试剂盒，两份3ml的菌，16小时摇菌，加到一个吸附柱，还是量很低。不知道该怎么办了...

1,2,3液 碱裂解后离心取上清，加入酚仿醇抽提，取上清加等体积乙醇,，离心获得沉淀，沉淀用含RNAse水溶解。

如果仍不能获得质粒，一般来说可能是菌样的问题。
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8楼2014-04-14 22:05:07
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
安小安4302: 金币+2, ★有帮助, 在amp在板子上挑的菌呀，也是含amp的液体培养基做的呀 2014-04-14 21:04:25
是不是菌株出问题了，空载体提的也是这个结果吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-04-14 20:47:10
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
安小安4302: 金币+2, 谢谢 2014-04-14 21:03:18
看下质粒是松弛型的还是严整型的，有必要的话可以用10ml菌去提
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操蛋的XX
3楼2014-04-14 20:48:47
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
安小安4302: 金币+2, ★有帮助, 就是用的碱裂解呀，要命了 2014-04-14 21:06:07
用分子克隆上的碱裂解法抽提的效果还是挺好的
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4楼2014-04-14 20:56:01
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