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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

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[求助] 引物设计后，看引物的特异性已有3人参与

本人菜鸟，刚刚学会设计引物。在验证引物特异性方面还有点疑问。这是我的一个引物的验证特异性的结果。求大家给看看特异性如何。
基因 NM_053056.2 Homo sapiens cyclin D1 (CCND1), mRNA
上游 CCCTCGGTGTCCTACTTCA
下游 CTCCTCGCACTTCTGTTCCT

MFEprimer2.0结果还不错。但是blast，有非特异的扩增，但是扩增片段蛮大的。求问战友，一般扩增多大的话可以忽略呢。要做好几种基因，有些基因的引物扩增还有几百bp的，这种是不是就不能忽略了呢。谢谢大家回答哈

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1楼 2014-04-11 20:28:02

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hualidy

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引用回帖:

4楼: Originally posted by Echo_QIN at 2014-04-13 13:39:45
你好，我也最近做这方便的工作，想检验下我的primer产物，可是我放到NCBI的primer－blast中输进去forwad primer 和reverse primer ，出来的结果只有关于primer 的性质，根本没有预期产物，请问能帮我分析下吗，谢谢 ...

反向引物也是5‘-3’的顺序，遇到这种情况就是你把反向引物给弄反了，以前我也试过，你再试试！