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yxh710

金虫 (小有名气)

[求助] 制备液相分离纯化样品溶解问题已有5人参与

一个全保护的多肽,含有20个氨基酸,显碱性,疏水性的片段,不溶于乙腈,甲醇,水,溶于DMF,醋酸,但是加一定比例的乙腈/水很容易析出,取2mg的样品用200ul的醋酸溶解后用200ul的50%乙腈/水稀释后上制备液相,流动相为0.1%TFA的水和乙腈,从10%-90%全梯度洗脱,在3min就出来一个大峰,后面就什么都没有了,按理说我这个样品极性比较小,为什么刚开始就冲出来了,是不是根本就没有挂在柱子上,现在就是不知道应该怎么溶解样品,把它分离纯化出来。求解
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yxh710

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by simi6948 at 2014-04-11 13:48:08
换试剂溶解了 可以的呢

换DMF吗,需要用什么稀释吗
有时候你生活里最想要的东西一直在你身边,可是到最后,发现也晚了
4楼2014-04-11 16:33:35
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yxh710

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by simi6948 at 2014-04-11 13:48:08
换试剂溶解了 可以的呢

换DMF吗,需要用什么稀释吗
有时候你生活里最想要的东西一直在你身边,可是到最后,发现也晚了
5楼2014-04-11 16:33:37
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yxh710

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 分离高手 at 2014-04-13 07:05:59
应该是醋酸的原因   你的柱子是不是C18或者C8的填料  我感觉分离碱性的多肽不是很合适。换个填料试试吧

谢谢啦,主要实验室就在只有C18和C8的柱子
有时候你生活里最想要的东西一直在你身边,可是到最后,发现也晚了
9楼2014-04-14 14:24:56
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yxh710

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 512303519 at 2014-04-13 08:56:56
酸的量太多,你的样品在柱子上没有保留,随醋酸峰带了出来。按道理20肽保留时间不会那么短的,建议继续用流动相稀释。之前我们遇到这现象可以加适量氨水溶解,然后再用酸适当调节ph值,不知道有没有帮助。

流动相稀释过多的话就会容易析出,是说先用醋酸溶剂后用氨水调节ph再进样试试吗,适当调节PH范围有具体要求吗,这个肽的ph为10.82左右,谢谢啦
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10楼2014-04-14 14:27:37
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