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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 如何确定一段序列中那一部分是启动子 已有3人参与

各位前辈大家好:我先一个问题感到不解,我通过抑制差减杂交获得了一段基因的序列,并且在网上和其同源序列比对,发现开放阅读框是拿到了,3'末端到了polyA,5'末端到了ATG之前的几个碱基。我用那这段序列和数据库比对找到了对应了DNA序列,并且有了ATG前面的6Kb多的序列,但我不知道启动子具体是哪部分,转录起始点是哪里?请问各位前辈有没有什么软件或者网站可以预测啊?或者有没有什么分子生物学手段进行研究,我想知道它受哪类转录因子调控。谢谢各位前辈了。
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-04-02 07:28:02
一般ATG前端2kb左右是启动子区域。

谢谢你了!
5楼2014-04-02 09:54:26
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查看全部 8 个回答

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lwk5716(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-02 08:31:39
lwk5716: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-04-02 10:06:26
你这个是经典的启动子mapping实验
很简单,你可以搞一个报告基因系统,Luciferase、CAT、甚至来个GFP也行。
然后找一个没有启动子的表达载体,Luciferase系统的就是pGL3-Basic应该
再把你怀疑有启动子活性的片段装进去
检测下游报告基因是否表达
用这个系统,你可以通过不断的做deletion,找到你这段长序列里面的核心启动子
看看《分子克隆》第三版,有这些内容很详细的说明
2楼2014-04-01 20:30:22
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
lwk5716(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-02 08:31:54
本帖内容被屏蔽

3楼2014-04-01 23:55:30
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lwk5716(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-02 08:32:10
lwk5716: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-02 09:54:02
一般ATG前端2kb左右是启动子区域。
hehe
4楼2014-04-02 07:28:02
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