应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » shRNA的构建
31/1返回列表
查看: 3442  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

ningning915

新虫 (小有名气)

[求助] shRNA的构建 已有1人参与

请问做RNA干扰设计的shRNA的启动子必须是RNA聚合酶iii类的启动子么？如果是的话，为什么RNA聚合酶ii的不行呢？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 分子生物学技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-31 20:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+10, MolEPI+1, 非常好！ 2014-03-31 21:43:34
ningning915: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-13 21:22:07
哈哈，总算来了一个有意思的问题，
你是怎么想的呢？
polII和polIII的区别，你知道多少呢？
shRNA的作用方式，你又知道多少呢？

这个必须从shRNA的作用方式说起，所谓RNAi，我们只谈动物中，关键在于siRNA，siRNA由Dicer切割shRNA而来。就这一步，在动植物，高等动物跟低等动物如果蝇线虫之间，就有很大的不同。且不谈。
Dicer切什么样的底物呢？short hairpin-RNA和long double strand RNA，后者多用于果蝇线虫系统。所以哺乳动物细胞中一般都表达shRNA。
作为Dicer最佳底物的shRNA有着结构的要求，其他样子的，切割效率会差。miRNA发现之后已经知道，比shRNA更长的，或者Dicer不能切，但是有hairpin sharp RNA的，被Drosha/DGCR8切。但是很明显，这回极大的降低效率，因为没有哪一步加工会是完全的。
所以，问题的关键回到了如何转录出一个short hairpin RNA
这才到了为什么选择polIII的问题
polIII和polII都有各自的启动子，虽然结构，序列，负责转录的聚合酶不一样，但是也差不多，一般而言+1位也比较固定。
但是区别在于polIII有着明确的终止信号，一般是几个T，5个足够了，你可以发现你设计的shRNA总是以5-6个T结束，这就限定了RNA的大小
但是polII不一样，转录是没有明确的终止这个概念的，所谓的终止就是RNA的polyadenylation，遇见这个信号之后，RNA随后发生切断，加A，但是其实RNA聚合酶还会继续跑一段的。这个不管
问题在于这个加A，这段A首先大小不一，其次一般都比较长，50nt平均肯定有，所以这个会极大的影响shRNA的结构。
所以这些shRNA表达载体，清一色的全是polIII启动子，一般也就用U6和H1 promoter，这两个的结构和起始转录位置研究得很透彻。
赞一下(7人) 回复此楼
2楼2014-03-31 20:56:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ningning915

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-31 20:56:20
哈哈，总算来了一个有意思的问题，
你是怎么想的呢？
polII和polIII的区别，你知道多少呢？
shRNA的作用方式，你又知道多少呢？

这个必须从shRNA的作用方式说起，所谓RNAi，我们只谈动物中，关键在于siRNA，s ...

刚刚开始了解干扰这方面，了解还是不透彻，最近正在学习者方面的。我要做的是昆虫sf9细胞中基因的干扰，short hairpin-RNA和long double strand RNA这两个的主要区别是什么呢？为什么果蝇线虫用的是后者呢？？
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-31 21:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ningning915 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 7/350 2026-07-31 12:10 by syhhffkrym
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 3/150 2026-07-31 12:08 by syhhffkrym
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 6/300 2026-07-31 12:05 by syhhffkrym
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +6 锦衣卫寒战 2026-07-28 6/300 2026-07-31 11:27 by syl200707
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +15 1234567wang 2026-07-25 19/950 2026-07-31 08:30 by ZJTJZ
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +8 布布和一二 2026-07-30 8/400 2026-07-31 01:51 by alongwaytogo
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 17/850 2026-07-30 20:10 by kissu88
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了？ +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么？ 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 没消息就是被刷了呗 +13 lambert2014 2026-07-24 14/700 2026-07-29 10:38 by msh145800
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭