应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » shRNA的构建
31/1返回列表
查看: 3333  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

ningning915

新虫 (小有名气)

[求助] shRNA的构建 已有1人参与

请问做RNA干扰设计的shRNA的启动子必须是RNA聚合酶iii类的启动子么？如果是的话，为什么RNA聚合酶ii的不行呢？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 分子生物学技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-31 20:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+10, MolEPI+1, 非常好！ 2014-03-31 21:43:34
ningning915: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-13 21:22:07
哈哈，总算来了一个有意思的问题，
你是怎么想的呢？
polII和polIII的区别，你知道多少呢？
shRNA的作用方式，你又知道多少呢？

这个必须从shRNA的作用方式说起，所谓RNAi，我们只谈动物中，关键在于siRNA，siRNA由Dicer切割shRNA而来。就这一步，在动植物，高等动物跟低等动物如果蝇线虫之间，就有很大的不同。且不谈。
Dicer切什么样的底物呢？short hairpin-RNA和long double strand RNA，后者多用于果蝇线虫系统。所以哺乳动物细胞中一般都表达shRNA。
作为Dicer最佳底物的shRNA有着结构的要求，其他样子的，切割效率会差。miRNA发现之后已经知道，比shRNA更长的，或者Dicer不能切，但是有hairpin sharp RNA的，被Drosha/DGCR8切。但是很明显，这回极大的降低效率，因为没有哪一步加工会是完全的。
所以，问题的关键回到了如何转录出一个short hairpin RNA
这才到了为什么选择polIII的问题
polIII和polII都有各自的启动子，虽然结构，序列，负责转录的聚合酶不一样，但是也差不多，一般而言+1位也比较固定。
但是区别在于polIII有着明确的终止信号，一般是几个T，5个足够了，你可以发现你设计的shRNA总是以5-6个T结束，这就限定了RNA的大小
但是polII不一样，转录是没有明确的终止这个概念的，所谓的终止就是RNA的polyadenylation，遇见这个信号之后，RNA随后发生切断，加A，但是其实RNA聚合酶还会继续跑一段的。这个不管
问题在于这个加A，这段A首先大小不一，其次一般都比较长，50nt平均肯定有，所以这个会极大的影响shRNA的结构。
所以这些shRNA表达载体，清一色的全是polIII启动子，一般也就用U6和H1 promoter，这两个的结构和起始转录位置研究得很透彻。
赞一下(7人) 回复此楼
2楼2014-03-31 20:56:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ningning915

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-31 20:56:20
哈哈，总算来了一个有意思的问题，
你是怎么想的呢？
polII和polIII的区别，你知道多少呢？
shRNA的作用方式，你又知道多少呢？

这个必须从shRNA的作用方式说起，所谓RNAi，我们只谈动物中，关键在于siRNA，s ...

刚刚开始了解干扰这方面，了解还是不透彻，最近正在学习者方面的。我要做的是昆虫sf9细胞中基因的干扰，short hairpin-RNA和long double strand RNA这两个的主要区别是什么呢？为什么果蝇线虫用的是后者呢？？
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-31 21:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ningning915 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 24/1200 2026-04-16 21:24 by Art1977
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 求调剂，985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 293求调剂 +16 我爱高数高数爱� 2026-04-12 18/900 2026-04-13 21:47 by 学员JpLReM
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 359求调剂 +5 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 19:55 by lbsjt
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸，感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550， 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭