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florachenyi

新虫 (小有名气)

[求助] 关于肿瘤干细胞转染的问题 已有1人参与

请问各位老师或师兄师姐,我想研究某一个蛋白A在肿瘤干细胞自我更新、分化中的作用,希望通过载体构建和RNA干扰的方式建立高、低表达A蛋白的肿瘤干细胞系。

那么,如果该肿瘤干细胞有分选标记(如CD133),我可以利用CD133流式分选后进行转染么?

如果该肿瘤干细胞没有分选标记,但是目前有其他方法可以富集(如干细胞球)肿瘤干细胞,可以进行转染么?求回复!
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treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
麻烦大了,肿瘤干细胞本来就是个概念型的定义,尤其是实体瘤,自己玩儿很难
要是有文献,先把肿瘤干细胞标记组合确定出来,按标记筛选,成瘤率验证
再折腾分子,估计也不好转,还要时刻对比普通肿瘤细胞,小分子抑制剂可能更简单。
确定分子细胞水平功能,再肿瘤功能验证,再有临床样本结合更好,再有治疗策略更好。
看着就满头是包
2楼2014-02-28 16:28:29
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

不推荐转染,病毒吧
分肿瘤干,先找maker,定抗体的克隆号(很重要,否则和报道的图不一致),最好用磁珠先粗分,然后流式细分。
没标记,就养肿瘤干细胞球
肿瘤干我·也计划养,看了看好像还是培养肿瘤球好些,但也有文献说肿瘤球中的细胞不见得一定是肿瘤干。

此外untouch之类的低吸附板子以及因子应该不便宜

正因为不好做,为了靠谱些,还是病毒吧,shRNA以及过表达也不要构建了,摸条件会累死的,累死还好,就怕累死了也没结果,建议买吧,我们当时过和敲都市买的,事半功倍,祝顺利!
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
3楼2014-03-01 00:37:38
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florachenyi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2014-03-01 00:37:38
不推荐转染,病毒吧
分肿瘤干,先找maker,定抗体的克隆号(很重要,否则和报道的图不一致),最好用磁珠先粗分,然后流式细分。
没标记,就养肿瘤干细胞球
肿瘤干我·也计划养,看了看好像还是培养肿瘤球好些, ...

谢谢您的详细解答!你说的很有道理,我们也是计划直接购买现成的。谢谢!祝您工作顺利,身体健康!
4楼2014-03-02 16:32:04
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一抹

新虫 (小有名气)

你说的好宽泛
Inner Peace
5楼2014-03-03 17:00:51
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