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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 关于肿瘤干细胞转染的问题
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florachenyi

新虫 (小有名气)

[求助] 关于肿瘤干细胞转染的问题 已有1人参与

请问各位老师或师兄师姐，我想研究某一个蛋白A在肿瘤干细胞自我更新、分化中的作用，希望通过载体构建和RNA干扰的方式建立高、低表达A蛋白的肿瘤干细胞系。

那么，如果该肿瘤干细胞有分选标记（如CD133），我可以利用CD133流式分选后进行转染么？

如果该肿瘤干细胞没有分选标记，但是目前有其他方法可以富集（如干细胞球）肿瘤干细胞，可以进行转染么?求回复！
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1楼 2014-02-27 18:34:32
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
不推荐转染，病毒吧
分肿瘤干，先找maker，定抗体的克隆号（很重要，否则和报道的图不一致），最好用磁珠先粗分，然后流式细分。
没标记，就养肿瘤干细胞球
肿瘤干我·也计划养，看了看好像还是培养肿瘤球好些，但也有文献说肿瘤球中的细胞不见得一定是肿瘤干。

此外untouch之类的低吸附板子以及因子应该不便宜

正因为不好做，为了靠谱些，还是病毒吧，shRNA以及过表达也不要构建了，摸条件会累死的，累死还好，就怕累死了也没结果，建议买吧，我们当时过和敲都市买的，事半功倍，祝顺利！
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
3楼2014-03-01 00:37:38
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treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
麻烦大了，肿瘤干细胞本来就是个概念型的定义，尤其是实体瘤，自己玩儿很难
要是有文献，先把肿瘤干细胞标记组合确定出来，按标记筛选，成瘤率验证
再折腾分子，估计也不好转，还要时刻对比普通肿瘤细胞，小分子抑制剂可能更简单。
确定分子细胞水平功能，再肿瘤功能验证，再有临床样本结合更好，再有治疗策略更好。
看着就满头是包
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2楼2014-02-28 16:28:29
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florachenyi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2014-03-01 00:37:38
不推荐转染，病毒吧
分肿瘤干，先找maker，定抗体的克隆号（很重要，否则和报道的图不一致），最好用磁珠先粗分，然后流式细分。
没标记，就养肿瘤干细胞球
肿瘤干我·也计划养，看了看好像还是培养肿瘤球好些， ...

谢谢您的详细解答！你说的很有道理，我们也是计划直接购买现成的。谢谢！祝您工作顺利，身体健康！
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4楼2014-03-02 16:32:04
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