应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 急求：免疫共沉淀求助！
51/1返回列表
查看: 2844  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

环形山川

铜虫 (初入文坛)

[求助] 急求：免疫共沉淀求助！ 已有3人参与

做了免疫共沉淀然后跑WESTERN,考马斯亮蓝染胶，过夜，清洗，至始至终目的和对照只有IgG重链条带,其它再没了。另外一个是细胞裂解液INPUT，没有发现异样。照理说怎么可能只有重链没轻链呢，难道是蛋白量少了（我提的是600UG蛋白）？还是蛋白和珠子结合太紧密（100度5min处理）？求各位大神指教啊！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-18 16:52:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蕉鹿殇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的目标蛋白是胞质蛋白还是膜蛋白？用的哪家哪种RIPA？最好是有成分。轻链理论上用10%的胶是可以看到的。1，试一下全程用80～100V跑，最好用现稀释的缓冲液。2，考染前加一个固定的步骤吧。
赞一下 回复此楼
9楼2014-04-20 16:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
环形山川: 金币+1, ★有帮助 2014-03-18 17:17:15
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:01:42
首先，考马斯亮蓝染色，分辨率低，最好做western
其次，轻链很小，20kd左右，不知你胶跑开没有，另外还是考马原因，辨识度低
最后，总结下，还是用抗体检测比较靠谱
赞一下 回复此楼
多情总被无情扰。。。愁
2楼2014-03-18 16:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

环形山川

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-03-18 16:59:19
首先，考马斯亮蓝染色，分辨率低，最好做western
其次，轻链很小，20kd左右，不知你胶跑开没有，另外还是考马原因，辨识度低
最后，总结下，还是用抗体检测比较靠谱

我这个主要找的是结合蛋白，所以必须要考染然后结合PULLDOWN做质谱的，所以做不了WESTERN，然后我用的是12%的胶和10%的胶都试过了，结果一样，25KD那里是白板。。。
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-18 17:15:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaolong11a

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 环形山川 at 2014-03-18 17:15:32
我这个主要找的是结合蛋白，所以必须要考染然后结合PULLDOWN做质谱的，所以做不了WESTERN，然后我用的是12%的胶和10%的胶都试过了，结果一样，25KD那里是白板。。。...

哦，这个不知道了，没经验
赞一下 回复此楼
多情总被无情扰。。。愁
4楼2014-03-19 08:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭