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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 合成抗原纯化问题
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鬼豆虫

木虫 (正式写手)

[求助] 合成抗原纯化问题

小分子半抗原和BSA蛋白连接，形成全抗原后，怎么分离纯化？文献上全部是透析。可是有些小分子半抗原，还有DDC链接剂都不溶于水，可以透析除去吗？

[ Last edited by 鬼豆虫 on 2012-5-16 at 14:19 ]
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君子见机，达人知命
1楼 2012-05-16 14:17:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

longqingci

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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鬼豆虫: 金币+5, ★★★很有帮助, 可以吗可以吗？！透析的威力这么大啊... 2012-05-18 08:27:21
即使DCC不溶解，也可以通过透析除去。但通常为了透析更快，可以先离心，之透析上清即可。
小分子连接后，不可能被透析除去，剩下的没连接的化合物或者偶联臂或者DCC,EDC,NHS都可以被透析除去
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8楼2012-05-17 10:39:58
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
鬼豆虫: 金币+3, ★★★很有帮助, 嗯。3Q。没用过PD脱盐柱，还要现买。 2012-05-18 08:33:35
实际上抗原合成后，透析交换缓冲液体系就好，去除合成过程中用到的一些有机溶剂，你要觉得透析不好的话，你也可以直接过PD-10脱盐柱啊，这个也是可以的。
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12楼2012-05-17 15:11:07
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
鬼豆虫: 金币+3, ★★★很有帮助, 嗯。直接免疫可能没问题。但是用来做elisa抗原，可能会影响吧... 2012-05-18 08:34:22
DCC就是个偶联剂，和EDC作用是一样的，只是EDC水溶性更好而已。楼主大可不必担心这个问题，及时免疫也没任何问题。
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13楼2012-05-17 15:14:44
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
鬼豆虫: 金币+4, ★★★很有帮助, 嗯。3Q。 2012-05-18 17:01:30
引用回帖:
13楼: Originally posted by 一步一步 at 2012-05-17 15:14:44:
DCC就是个偶联剂，和EDC作用是一样的，只是EDC水溶性更好而已。楼主大可不必担心这个问题，及时免疫也没任何问题。

你说的是做Elisa检测原的，这个我觉得影响也不是很大啊。本身你在做Elisa之前是透析过的，已经有一部分透析掉了，剩下的部分量也很少了，而且还要经过洗板等等。载体蛋白的空间位阻远比DCC大，偶联好的小分子在载体蛋白表面，应该是没有太大影响的。
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15楼2012-05-18 15:09:10
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普通回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)
★ ★
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-05-16 18:18:16
不溶于水的离心，去沉淀，再透析不就行了。。如果是做免疫的话，直接打好了
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2楼2012-05-16 14:46:51
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鬼豆虫

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-05-16 14:46:51:
不溶于水的离心，去沉淀，再透析不就行了。。如果是做免疫的话，直接打好了

嗯。但是我10000rpm离心20min，取上清4度静置一晚上，第二天10000rpm离心又出现少许沉淀。
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君子见机，达人知命
3楼2012-05-16 15:59:25
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Mimotopesdyc

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 应助指数-1, 非应助 2012-10-15 08:04:01
本帖内容被屏蔽
4楼2012-05-16 16:13:24
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鬼豆虫

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Mimotopesdyc at 2012-05-16 16:13:24:
请问你所说的DDC是一种什么性质的东西？

N,N'-二环己基碳二亚胺
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君子见机，达人知命
5楼2012-05-16 16:40:00
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鬼豆虫

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Mimotopesdyc at 2012-05-16 16:13:24:
请问你所说的DDC是一种什么性质的东西？

蜡装固体，很硬。不溶于水，溶于有机溶剂。
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君子见机，达人知命
6楼2012-05-16 16:41:09
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qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
鬼豆虫: 金币+4, ★★★很有帮助, 嗯。 2012-05-17 08:26:18
沉淀出来的是否是BSA偶联的小分子，你把沉淀电泳一下就知道了
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7楼2012-05-16 19:05:03
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

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★ ★ ★ ★
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鬼豆虫: 金币+4, ★★★很有帮助, (⊙v⊙)嗯。非常感谢！ 2012-05-18 08:29:19
你透析或者用超滤管超滤都是可以使偶联物达到纯化。不用担心DCC的，它只是在你活化过程中，在无水条件下DCC发挥催化作用生成活化酯，后续你再将活化酯滴入蛋白中偶联的时候，就没DCC的事了。离心就透析或者超滤吧，不担心DCC。这是我的理解，希望对你有用！
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Orbetterit,orenjoyit!
9楼2012-05-17 12:37:37
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lowry_tsang

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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鬼豆虫: 金币+4, ★★★很有帮助, 因为我要反应的半抗原是脂溶性的。 2012-05-18 08:30:43
透析之前如果有沉淀可以先离心去除沉淀，透析的过程中小分子基本都可以去除的。另外DCC是不溶于水的，怎么不考虑用EDC/NHS，效果应该差不多吧。
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10楼2012-05-17 14:39:23
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