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金虫 (小有名气)

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[求助] pGEM-T载体连接大片段目的基因需要考虑的问题已有3人参与

想要连接2000-4000大小的目的片段到promega的pGEM-T载体上，感受态是商业化的。目的基因是用TAKARA的primestar HS 扩增得到。之前看到连接大片段比较麻烦，我大概需要注意哪些问题呢，求各位指导，多谢！

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1楼 2014-03-18 09:51:20

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引用回帖:

2楼: Originally posted by oylb at 2014-03-18 11:18:14
大片段的连接反应，效率会略微低一些，增加连接时间、连接完成后4℃放置一定时间，都可以提高连接效率。应该是可以成功连接的。

primestar HS不能在PCR产物末端加A，所以不能连接到T载体上。必须要在扩增并回收完 ...

一般连接是4℃放置16h以上的。primestar HS PCR过后怎么用普通Taq加末端A？