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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 4613.4
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在线: 63.5小时
虫号: 2063333
注册: 2012-10-15
性别: GG
专业: 生殖生物学

[求助] Primer 引物设计相关问题

用primer5设计引物时，会限定上下游引物所在碱基的范围，也会限定所克隆基因长度范围，但是我想知道，如果上下游引物之间的一段DNA序列既包括目的基因又包括其他基因怎么办？那岂不是扩增出来的不是目的基因吗？！还有，如果评分最高的那对引物的分数也不是多高，比如说只有80或者左右的话该怎么办？这对引物有二聚体或者碱基错配要该怎么修改上下游引物位置？修改后又会出现其他的问题，比如说出现发卡结构或者引物间二聚体该怎么办？同时问一下，“false primering”是什么意思？该怎么修改呢？
最后问一个问题，如何在引物上添加酶切位点？
各位虫友各位大神，本人大三科研吊丝一枚，初入科研之路，尚未用primer设计任何引物，只是从网上了解到这个软件，并自己摸索着试用了一下，发现很多自己理解不了，或许是非常幼稚的问题，希望各位不要对这么多的问题不耐烦，恳请各位虫友不吝赐教。【最好附上截屏图】另外，如果有相关文献可以帮组到我的话，也请各位能发给小虫研读。
大恩不言谢