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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

[求助] Primer 引物设计相关问题

用primer5设计引物时,会限定上下游引物所在碱基的范围,也会限定所克隆基因长度范围,但是我想知道,如果上下游引物之间的一段DNA序列既包括目的基因又包括其他基因怎么办?那岂不是扩增出来的不是目的基因吗?!还有,如果评分最高的那对引物的分数也不是多高,比如说只有80或者左右的话该怎么办?这对引物有二聚体或者碱基错配要该怎么修改上下游引物位置?修改后又会出现其他的问题,比如说出现发卡结构或者引物间二聚体该怎么办? 同时问一下,“false primering”是什么意思?该怎么修改呢?  
最后问一个问题,如何在引物上添加酶切位点?
各位虫友各位大神,本人大三科研吊丝一枚,初入科研之路,尚未用primer设计任何引物,只是从网上了解到这个软件,并自己摸索着试用了一下,发现很多自己理解不了,或许是非常幼稚的问题,希望各位不要对这么多的问题不耐烦,恳请各位虫友不吝赐教。【最好附上截屏图】   另外,如果有相关文献可以帮组到我的话,也请各位能发给小虫研读。
大恩不言谢
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