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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 挑单菌落，摇不起来
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

[求助] 挑单菌落，摇不起来 已有7人参与

做克隆，转化后，长了大概有20个菌，鉴定时挑5个，结果却没摇起来。与昨天结果一样，抗生素，温度都正常啊，不知道什么原因。如果不是我要的东西的话，加了抗生素的板儿上长了呀。怎么可能摇不起来呢
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1楼 2014-02-26 22:08:14
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以做个菌体PCR先鉴定一下。
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2楼2014-02-26 22:20:41
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qiaozheng1

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加抗生素的时候温度高吗？
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3楼2014-02-26 22:57:45
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的抗生素有没有问题？
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学习使你立于不败之地
4楼2014-02-26 22:57:47
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 17:15:32
本帖内容被屏蔽
5楼2014-02-27 02:44:22
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-28 21:33:07
1.如果是大肠杆菌，摇菌时间超过16小时摇不起来说明有问题。
2.这种情况我一个师兄遇到过，重新做转化也这样。左后把东西全都换了新的，重新转化做出来的。
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6楼2014-02-27 11:18:41
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
泡菜肉丝(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-01 14:39:24
你用什么挑的克隆？是不是没挑中？我有一次用枪头挑就没挑中，后来重新挑，长得很快。楼主出现这个问题的原因还可能是你的液体培养基有问题，是不是抗性浓度太高了？存在噬菌体污染也是一种可能。。。。
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
7楼2014-02-27 12:59:03
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太行九天

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
泡菜肉丝(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-01 14:39:34
我这几天也在做表达，出现了与楼主相似的问题，我这平板上只长了五个菌，挑了三个，摇床过夜培养，结果只有一支管长菌了，然后取三毫升菌液提质粒，电泳后又没条带，正在纠结中。。。各位大神也帮忙分析分析。
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强大内心！
8楼2014-02-27 14:09:02
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-27 11:18:41
1.如果是大肠杆菌，摇菌时间超过16小时摇不起来说明有问题。
2.这种情况我一个师兄遇到过，重新做转化也这样。左后把东西全都换了新的，重新转化做出来的。

是啊，感觉是污染了，因为现阶段实验室做克隆的有点多。只能重新转
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9楼2014-02-28 20:47:25
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-27 12:59:03
你用什么挑的克隆？是不是没挑中？我有一次用枪头挑就没挑中，后来重新挑，长得很快。楼主出现这个问题的原因还可能是你的液体培养基有问题，是不是抗性浓度太高了？存在噬菌体污染也是一种可能。。。。

我用枪头和接种环。培养基和抗性应该也没问题，就是实验室大家做克隆的多，不注意，可能污染了，玩偶有重新做的。谢谢了
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10楼2014-02-28 20:49:51
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