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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒非单克隆，怎么办？
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南山石

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 质粒非单克隆，怎么办？ 已有4人参与

请教大家，我经过酶切验证后送测序的一个目的基因的质粒，测序公司回报结果说非单克隆，我接下去该怎么做然后再次送去测序？有没有解决过同样问题朋友们？小弟在这里谢谢大家的帮助！
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1楼 2014-02-24 20:35:25
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 21:11:57
把你的菌划线挑单克隆摇菌重新测序。
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hehe
2楼2014-02-24 20:50:30
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 21:12:16
1.提质粒
2.根据质粒大小，分出正确的，回收。
3.把质粒直接转入DH5a转化，挑单克隆。
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3楼2014-02-24 20:56:33
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 21:12:10
楼主实验过程中污染了吧？建议挑单克隆扩大培养后再送测序
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-02-24 21:07:12
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南山石

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-24 21:07:12
楼主实验过程中污染了吧？建议挑单克隆扩大培养后再送测序

哦，我用这个送测序的质粒重新转化，扩大培养再挑取单克隆，送测序，是这样做吗？
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5楼2014-02-24 21:17:11
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-25 11:57:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by 南山石 at 2014-02-24 21:17:11
哦，我用这个送测序的质粒重新转化，扩大培养再挑取单克隆，送测序，是这样做吗？...

先转化质粒，涂板后挑克隆摇出来的菌液就可以送测序，不过送测序前最好再验证一下
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
6楼2014-02-24 21:46:01
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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-25 11:57:44
也可以将提取正确的质粒重新转化，挑菌，好好提一次质粒。鉴定正确可直接送DNA测序，也可给对方对应的菌体。如果说信号不好，可能也存在质粒拷贝数低的情况。
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7楼2014-02-24 22:00:57
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南山石

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by shiyiyaya at 2014-02-24 22:00:57
也可以将提取正确的质粒重新转化，挑菌，好好提一次质粒。鉴定正确可直接送DNA测序，也可给对方对应的菌体。如果说信号不好，可能也存在质粒拷贝数低的情况。

非常感谢您的回复！
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8楼2014-02-25 10:54:23
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