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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 有关质粒提取的问题。。。急！！！
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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 有关质粒提取的问题。。。急！！！ 已有2人参与

小弟最近做red重组，用的质粒pkd46（6329bp），每次提完跑胶都在12000左右，应该是形成了二聚体，单酶切后跑胶大小正常。请问下：质粒形成二聚体会影响质粒上基因的表达吗？
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1楼 2014-02-18 13:07:52
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liulugang

木虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by yipan at 2014-02-18 13:24:38
细菌质粒是独立于细菌染色体的自主复制的环状双链DNA分子，只有酵母的杀伤质粒(killerplasmid)已知是RNA分子。环形双链DNA分子有三种构型。第一种是共价闭合环状DNA(covalently close circular DNA，ccc DNA)，它的 ...

哥们，谢谢打了这么多，受教了。但是我想问的是：质粒这样形成二聚体会影响质粒上基因的表达吗？
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3楼2014-02-18 14:17:20
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liulugang

木虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by XOooZzz at 2014-02-18 15:04:22
未必就是二聚体吧。
说不定你那看似12000的片段只是开环状态的质粒。

谢谢了。我每次只能提出12000大小的质粒，正常大小（6329）的就是提不出，这正常吗？
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7楼2014-02-18 16:05:23
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liulugang

木虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-02-18 14:23:36
质粒自连一般会影响蛋白的表达，而且质粒自连后比较大，不太稳定，而且不容易电转化。你是需要表达那三个功能蛋白的，不建议用自连的质粒去实验。最好是用原先正确的质粒。如你所说可以将自连的质粒单切，单切后做 ...

谢谢了。
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8楼2014-02-18 16:06:21
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liulugang

木虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by XOooZzz at 2014-02-18 16:33:17
你的意思是，取不同的转化子提质粒，质粒直接跑胶条带都在约12000的位置吗？
这里有一个问题。提取的质粒要么是超螺旋，要么是开环，基本没有线性化的，它们的电泳速度各不相同，所以这根本看不出质粒的大小啊.......

是的，所有的转化子都是12000的位置。那我需要单切后再连接，重新转化吗？
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10楼2014-02-18 18:33:06
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liulugang

木虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by XOooZzz at 2014-02-18 20:25:30
如果是我就直接做后续实验了。
我是觉得，不可能所有转化子都正好形成“二聚体”的，即使有“二聚体”也只会是少数。但是我没有做过重组，不太了解细节，也许实验上某个意料之外的细节导致大量“二聚体”的产生？ ...

好的，谢谢了
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12楼2014-02-19 13:29:52
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