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关于杏仁蛋白分离的问题
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大家好，有一个问题，杏仁蛋白粗提液（杏仁缓冲液浸提-硫酸铵沉降-透析-粗提液），过柱子（各种填料都试过），pH9，所有蛋白一块下来，用的是盐浓度梯度洗脱，其中这些蛋白加了巯基乙醇做还原电泳后，电泳条带就会分解，如一条5W就分成2W+3W的两个条带。杏仁蛋白液里面脂含量特别多，也给做过脂染有显色。 不知道大家谁有做过类似的蛋白分离的？都是怎么分离的？ 觉得现在没办法用盐梯度洗脱了，怎么洗都是一块出来的，不知道大家有没什么建议啊？ 还有一点把蛋白粗提液脱脂｛一份蛋白液配20份脱脂液（乙醚：乙醇=3：2）｝，加了巯基乙醇，然后上样过柱子，之后拿有OD峰的和上样液做电泳，发现上样液是5W被打断成2条的，而洗脱液又变成2条小的重新组成5W那条大的，用的是离子交换填料UNOQ，pH9. 而且洗出来的不多，一样是各种蛋白一块下来，用的是0-2M的盐梯度洗脱。 不知道巯基乙醇在过柱子过程中会怎么样？能导致上柱前蛋白一样样，上柱后蛋白又一个样？ 不用盐梯度的话，大家有没什么好的办法推荐啊 |
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