应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】反相HPLC分离蛋白质
61/1返回列表
查看: 1371  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sqhnsd

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】反相HPLC分离蛋白质 已有3人参与

有没有做过RP-HPLC分离蛋白的？交流一下， 我最近做的比较郁闷，分离效果不好
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-12 10:23:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皖山潜凤

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-13 13:51:32
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-12 10:23:05:
有没有做过RP-HPLC分离蛋白的？交流一下， 我最近做的比较郁闷，分离效果不好

效果不好是个啥意思， 啥都没说，怎么交流呢？

RP hplc不是万能的，或者在说如果前面没有其他分离操作，rphplc啥都不是。

国内一些人为了写文章， 把 rp hplc吹的很高， 其实一种分离方法而已，你说有多牛？  利用的不过是疏水层析，能分的多好？
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-13 12:54:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
你好，我的问题：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2285152&fpage=3
你可以看看我的图。
我的样品制备过程如下：
样品为大肠杆菌全蛋白，SDS-PAGE后按照分子量进行分离，后将不同分子量蛋白进行电洗脱，然后通过透析+丙酮沉淀去除盐和SDS，A、B图分离效果比较理想，分子量介于10-20 kDa组分，不同组分间上样量差别不大（2倍左右）。
可能的问题：
1.SDS没有除干净：这个不太可能，A、B分离还挺好，其他组分也都是同样的处理方式。
2.分子量大影响分离：C8柱子Pore size 300 A，之后换了pore size 为1000 A的（C含量介于C4 -C8）R2柱子，分离效果没有改善。
3. 流速：流速快可能影响传质效率，因此，在R2柱子上将流速降为0.5ml/min，其他条件不变，分离效果仍然没有改善。

所以，现在我不知道问题出在哪里，请高手指点。
赞一下 回复此楼
3楼2010-08-13 13:18:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 皖山潜凤 at 2010-08-13 12:54:33:



效果不好是个啥意思， 啥都没说，怎么交流呢？

RP hplc不是万能的，或者在说如果前面没有其他分离操作，rphplc啥都不是。

国内一些人为了写文章， 把 rp hplc吹的很高， 其实一种分离方法而已，你说有 ...

你好，我的问题：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2285152&fpage=3
你可以看看我的图。
我的样品制备过程如下：
样品为大肠杆菌全蛋白，SDS-PAGE后按照分子量进行分离，后将不同分子量蛋白进行电洗脱，然后通过透析+丙酮沉淀去除盐和SDS，A、B图分离效果比较理想，分子量介于10-20 kDa组分，不同组分间上样量差别不大（2倍左右）。
可能的问题：
1.SDS没有除干净：这个不太可能，A、B分离还挺好，其他组分也都是同样的处理方式。
2.分子量大影响分离：C8柱子Pore size 300 A，之后换了pore size 为1000 A的（C含量介于C4 -C8）R2柱子，分离效果没有改善。
3. 流速：流速快可能影响传质效率，因此，在R2柱子上将流速降为0.5ml/min，其他条件不变，分离效果仍然没有改善。

所以，现在我不知道问题出在哪里，请高手指点。
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-13 13:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

烟大考研

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-13 13:18:58:


你好，我的问题：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2285152&fpage=3
你可以看看我的图。
我的样品制备过程如下：
样品为大肠杆菌全蛋白，SDS-PAGE后按照分子量进行分离，后将不同 ...

我们用的是C18柱子，你说的那些柱子我都没有用过，这种柱子分离的蛋白小于120Kd，效果不错
赞一下(1人) 回复此楼
心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
5楼2010-08-13 14:12:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 烟大考研 at 2010-08-13 14:12:31:

  我们用的是C18柱子，你说的那些柱子我都没有用过，这种柱子分离的蛋白小于120Kd，效果不错

真的啊，可能是个案吧，C18含碳量太大了
赞一下 回复此楼
6楼2010-08-13 15:15:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sqhnsd 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭