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sqhnsd金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】反相HPLC分离蛋白质 已有3人参与
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| 有没有做过RP-HPLC分离蛋白的？交流一下， 我最近做的比较郁闷，分离效果不好 |
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5楼2010-08-13 14:12:31
2楼2010-08-13 12:54:33
sqhnsd
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 515.3
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- 在线: 56.9小时
- 虫号: 1045397
- 注册: 2010-06-22
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
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你好，我的问题： http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2285152&fpage=3 你可以看看我的图。 我的样品制备过程如下： 样品为大肠杆菌全蛋白，SDS-PAGE后按照分子量进行分离，后将不同分子量蛋白进行电洗脱，然后通过透析+丙酮沉淀去除盐和SDS，A、B图分离效果比较理想，分子量介于10-20 kDa组分，不同组分间上样量差别不大（2倍左右）。 可能的问题： 1.SDS没有除干净：这个不太可能，A、B分离还挺好，其他组分也都是同样的处理方式。 2.分子量大影响分离：C8柱子Pore size 300 A，之后换了pore size 为1000 A的（C含量介于C4 -C8）R2柱子，分离效果没有改善。 3. 流速：流速快可能影响传质效率，因此，在R2柱子上将流速降为0.5ml/min，其他条件不变，分离效果仍然没有改善。 所以，现在我不知道问题出在哪里，请高手指点。 |
3楼2010-08-13 13:18:04
sqhnsd
金虫 (正式写手)
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- 专业: 蛋白质组学
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你好，我的问题： http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2285152&fpage=3 你可以看看我的图。 我的样品制备过程如下： 样品为大肠杆菌全蛋白，SDS-PAGE后按照分子量进行分离，后将不同分子量蛋白进行电洗脱，然后通过透析+丙酮沉淀去除盐和SDS，A、B图分离效果比较理想，分子量介于10-20 kDa组分，不同组分间上样量差别不大（2倍左右）。 可能的问题： 1.SDS没有除干净：这个不太可能，A、B分离还挺好，其他组分也都是同样的处理方式。 2.分子量大影响分离：C8柱子Pore size 300 A，之后换了pore size 为1000 A的（C含量介于C4 -C8）R2柱子，分离效果没有改善。 3. 流速：流速快可能影响传质效率，因此，在R2柱子上将流速降为0.5ml/min，其他条件不变，分离效果仍然没有改善。 所以，现在我不知道问题出在哪里，请高手指点。 |
4楼2010-08-13 13:18:58
