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xixi_pds7

银虫 (小有名气)

[求助] 求助重建质粒的问题 已有1人参与

我手头的质粒不合适,要重新换promoter和抗性筛选标记,所以,想问下如何更换?
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励交流! 2014-01-18 16:11:13
1.如果这个载体与其他的载体是一个系列的(启动子,筛选标记基因都一样,基因不一样),可以看看其他的载体用。
2.如果不是,那么可以设计引物分别扩增启动子和筛选标记,连接更换。
3.如果其他载体上的启动子两端、筛选标记两端的酶切位点与你现在的载体一样,可以直接酶切、连接更换。
2楼2014-01-16 15:00:49
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xixi_pds7

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-01-16 15:00:49
1.如果这个载体与其他的载体是一个系列的(启动子,筛选标记基因都一样,基因不一样),可以看看其他的载体用。
2.如果不是,那么可以设计引物分别扩增启动子和筛选标记,连接更换。
3.如果其他载体上的启动子两端 ...

第一:您的 意思是说,把我的目标基因片段切下来,然后插入另一个载体上么?
第二:启动子跟筛选标记是从另一个vector上切么?
第三,酶切点不一样
3楼2014-01-17 14:25:04
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qiaozheng1

木虫 (正式写手)

2楼说的对啊
4楼2014-01-17 21:09:16
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xixi_pds7 at 2014-01-17 14:25:04
第一:您的 意思是说,把我的目标基因片段切下来,然后插入另一个载体上么?
第二:启动子跟筛选标记是从另一个vector上切么?
第三,酶切点不一样...

酶切点不一样,所以启动子跟筛选标记是从另一个vector上直接切,需要扩增。  
如果另一个载体正好有你要的启动子和筛选标记,就可以直接把目标基因片段切下来,然后插入这个载体上。
5楼2014-01-18 11:21:25
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