应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因组DNA模板质量对PCR有什么影响
51/1返回列表
查看: 4804  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[交流] 基因组DNA模板质量对PCR有什么影响

各位亲 基因组DNA模板进行PCR扩增时，其质量对其有什么影响？我提取的基因组DNA跑电泳，只出现一条细细规则的条带，感觉t提的还挺不错的，但测浓度纯度的时候，OD260/OD280比值却大于2，有的甚至是3或4，提取的时候加入了RNase，电泳也没看到RNA条带，用这样的基因组DNA扩增PCR，扩增不出目的条带，各位大神帮忙分析一下吧  谢谢啦

[ Last edited by silicare on 2014-2-19 at 11:33 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-30 19:29:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-31 01:50:40
PCR对基因组模板的纯度要求不高，通常含有少量盐、蛋白或者RNA都可以用。OD260/280过高，超过2，可能是核酸仪出了问题。如果跑电泳条带中无RNA，应该不是RNA的问题了。如果P不出来，可能有很多原因，模板用量是否正 ...

我先在遇到一个相当让我捉摸不透的问题，同样的引物，体系也一样，只是模板不一样，却有的在64度退火温度能P出目的条带，有的在56度能P出目的条带，请问这是什么原因造成的呢
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-31 08:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
摩羯的心(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-31 12:45:50
PCR对基因组模板的纯度要求不高，通常含有少量盐、蛋白或者RNA都可以用。OD260/280过高，超过2，可能是核酸仪出了问题。如果跑电泳条带中无RNA，应该不是RNA的问题了。如果P不出来，可能有很多原因，模板用量是否正确？（跑电泳可见，说明浓度还不错，需要稀释后再P）。引物的退火温度选得是否合适？PCR体系建立是否有问题等。
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-31 01:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 14:15:33
引用回帖:
7楼: Originally posted by 摩羯的心 at 2013-12-31 08:20:10
我先在遇到一个相当让我捉摸不透的问题，同样的引物，体系也一样，只是模板不一样，却有的在64度退火温度能P出目的条带，有的在56度能P出目的条带，请问这是什么原因造成的呢...

是P出同样的条带吗？一对引物通常能够在较大的退火温度范围下都有不错的扩增，所以56-64°C都可以P出来的情况也是正常的。还有可能是由于模板中的盐浓度不同而造成退火温度差异。通常提gDNA的protocol里的buffer通常含有一定浓度的NaCl，如果沉淀DNA时加入了醋酸钠，都会引入高浓度的钠离子。引物的退货温度与钠离子浓度有关。
赞一下 回复此楼
8楼2013-12-31 12:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

achonghello

金虫 (正式写手)
★
摩羯的心(金币+1): 谢谢参与

目的条带大不大？退货时间啊温度啊什么的都调调试试看。。。
赞一下 回复此楼
9楼2013-12-31 13:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 8/400 2026-09-18 10:06 by yS4CkeWDhD6V
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 9/450 2026-09-18 09:16 by yS4CkeWDhD6V
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 C79jjtjAKjEn 2026-09-15 3/150 2026-09-18 03:40 by cITaGg3p5edr
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 4/200 2026-09-18 02:28 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-18 02:16 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-18 01:54 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 23:28 by cuPZTDXS3VOd
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 9/450 2026-09-17 23:05 by cuPZTDXS3VOd
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +7 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 22:53 by cuPZTDXS3VOd
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-17 22:39 by cuPZTDXS3VOd
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 15:29 by 0ngsZVSCTS7z
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:27 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:15 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:15 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:53 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:15 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 4/200 2026-09-17 06:26 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:28 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭