| 查看: 2226 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
海之韵-哈哈银虫 (小有名气)
|
[求助]
native-page活性染色 已有3人参与
|
||
| 最近在做native-page活性染色，蛋白为木聚糖酶，理论上染色脱色后目的条带处应为无色且为单一条带，胶的其余部分应为红色。但是我做出来的结果是从点样孔到胶的三分之一处是无色的，而不是一条单一的条带，感觉目的蛋白是边跑边反应。（跑胶时是在冰浴中进行的）请问有没有这种边跑边反应的可能性啊？如何避免这种情况？ |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂
已经有4人回复
-
一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂
已经有4人回复
-
0854电子信息求调剂 324
已经有3人回复
-
303求调剂
已经有3人回复
-
336求调剂
已经有3人回复
-
306求调剂
已经有9人回复
-
工科0856求调剂
已经有4人回复
-
工科材料085601 279求调剂
已经有10人回复
-
081700 调剂 267分
已经有4人回复
-
276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菜鸟求教native-page的两个问题
已经有6人回复
- 考马斯亮蓝染色后的图片 不知如何解释
已经有8人回复
- Native-PAGE技术请教
已经有6人回复
- Native-PAGE的考马斯亮蓝染色
已经有6人回复
- SDS-PAGE电泳跑完，染色脱色都搞完，然后拍照把胶拿出来的时候老把胶弄破是怎么回事？
已经有5人回复
- 求碱性蛋白native-page配方及电泳方法
已经有16人回复
- 碱性蛋白Native-PAGE
已经有23人回复
- blue native ，SDS0-PAGE双向电泳
已经有9人回复
- 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有16人回复
- 变性PAGE跑DNA，请问是用什么染色？EB还是银染？
已经有8人回复
- sds-page染色脱色问题
已经有5人回复
- 细胞活性检测，OD CFU or流式细胞仪，or染色
已经有4人回复
- 求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色
已经有22人回复
- 求助：非变性胶问题
已经有4人回复
- SDS-PAGE电泳，菌液总蛋白，染色后显示的是弥散的
已经有5人回复
- 【求助/交流】请教native page的相关知识
已经有10人回复
海之韵-哈哈
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 234.6
- 帖子: 185
- 在线: 61.4小时
- 虫号: 2028353
- 注册: 2012-09-25
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
|
Native-page:12%分离胶配方(10ml):水 2.4ml，30%丙烯酰胺 4ml，1.5M pH8.8 Tris-HCl 2.5ml，10% APS 0.1ml，TEMED 0.004ml，1%木聚糖溶液（pH8.0 Tris-HCl配制）1ml 5%浓缩胶配方（5ml）：水 3.45ml，30%丙烯酰胺 0.83ml，1M pH6.8 Tris-HCl 0.63ml，10% APS 0.05ml，TEMED 0.005ml 5*Native-page上样buffer：1M pH6.8 Tris-HCl 1.25ml，溴酚蓝10mg，甘油2.5ml 刚果红染液：0.5g刚果红溶解到100ml 10%的乙醇中。 上样后80V50mA电泳至溴酚蓝前沿距胶1cm处，停止电泳。取出胶，浸泡在pH6.5柠檬酸-磷酸盐缓冲液（缓冲液是酶的最适反应缓冲液）中55度水浴30分钟，取出自来水冲洗两遍，加入刚果红染液染色30分钟，用1MNaCl溶液洗脱直至有清晰的条带出现。 电泳结果：1为原酶液，2酶液稀释10倍，3酶液稀释20倍，4酶液稀释50倍,5酶液稀释100倍 原酶液是由0.9%NaCl悬浮菌体超声波破碎后的上清液。 这次结果原酶液中跑出来一条带，但是跑不下来，溴酚蓝前沿已经跑到胶的最下面了。而且脱色后胶变成了黑色，以前用同样的方法染色脱色后胶布变黑，是红色的。   111.jpg |
9楼2014-01-07 12:11:05
weishen2
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 571.4
- 散金: 592
- 帖子: 62
- 在线: 136.8小时
- 虫号: 2489598
- 注册: 2013-05-31
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2014-01-04 10:23:20
3楼2014-01-04 21:48:28
海之韵-哈哈
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 234.6
- 帖子: 185
- 在线: 61.4小时
- 虫号: 2028353
- 注册: 2012-09-25
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2014-01-05 13:47:20
