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zhangbaocau

新虫 (小有名气)

[求助] Native-PAGE技术请教 已有1人参与

从左边到右边依次是2个真菌胞内可溶全蛋白、Marker，分离胶，3%-15%梯度胶，
请问大家，我跑Native-PAGE与SDS-PAGE在操作上、配方基本上是相同的，只是配方、上样缓冲液等都去掉了SDS、 疏基乙醇（样品处理也未加热），但Native-PAGE明显跑的不好，连Marker都没跑出来，求高手指点，谢谢！
其中下图SDS-PAGE10%分离胶，4%浓缩胶，
Native-PAGE技术请教
Native-PAGE


Native-PAGE技术请教-1
SDS-PAGE
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1楼 2013-07-12 11:28:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-12 11:51:49
这很正常，native-page没有SDS增加蛋白表面的负电荷，蛋白只有靠自身携带的电性往正极跑，所以速度比较慢，而且条带没有变性胶漂亮。至于marker为什么不好我不是很清楚。可能marker的蛋白中有些是碱性蛋白，所以不往下跑？
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2楼2013-07-12 11:49:08
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zhangbaocau

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-12 11:49:08
这很正常，native-page没有SDS增加蛋白表面的负电荷，蛋白只有靠自身携带的电性往正极跑，所以速度比较慢，而且条带没有变性胶漂亮。至于marker为什么不好我不是很清楚。可能marker的蛋白中有些是碱性蛋白，所以不往 ...

哦，谢谢，请问Native-PAGE一定要恒流吗？？SDS-PAGE一般是恒压（80V，120V）
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3楼2013-07-12 16:31:27
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zhangbaocau

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-12 11:49:08
这很正常，native-page没有SDS增加蛋白表面的负电荷，蛋白只有靠自身携带的电性往正极跑，所以速度比较慢，而且条带没有变性胶漂亮。至于marker为什么不好我不是很清楚。可能marker的蛋白中有些是碱性蛋白，所以不往 ...

另外，第3道marker应该是酸性蛋白，往下（正极)跑的，只是没跑开啊，不知道是不是因为胶的梯度浓度太低了？？
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4楼2013-07-12 16:34:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
zhangbaocau: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-07-14 19:04:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangbaocau at 2013-07-12 16:31:27
哦，谢谢，请问Native-PAGE一定要恒流吗？？SDS-PAGE一般是恒压（80V，120V）...

不一定恒流。跑胶用恒压或者恒流主要看操作方便和个人习惯。
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5楼2013-07-12 23:07:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
zhangbaocau: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-07-14 19:05:06
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangbaocau at 2013-07-12 16:34:23
另外，第3道marker应该是酸性蛋白，往下（正极)跑的，只是没跑开啊，不知道是不是因为胶的梯度浓度太低了？？...

native-page跑起来很慢的，因为电荷少。看你要分的蛋白在什么位置了。你可以适当延长跑胶时间。
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6楼2013-07-12 23:09:55
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深爱小李

禁虫
本帖内容被屏蔽
7楼2021-12-02 20:51:43
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