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zhangbaocau

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[求助] Native-PAGE技术请教已有1人参与

从左边到右边依次是2个真菌胞内可溶全蛋白、Marker，分离胶，3%-15%梯度胶，
请问大家，我跑Native-PAGE与SDS-PAGE在操作上、配方基本上是相同的，只是配方、上样缓冲液等都去掉了SDS、疏基乙醇（样品处理也未加热），但Native-PAGE明显跑的不好，连Marker都没跑出来，求高手指点，谢谢！
其中下图SDS-PAGE10%分离胶，4%浓缩胶，

Native-PAGE

SDS-PAGE

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1楼 2013-07-12 11:28:26

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-12 11:51:49

这很正常，native-page没有SDS增加蛋白表面的负电荷，蛋白只有靠自身携带的电性往正极跑，所以速度比较慢，而且条带没有变性胶漂亮。至于marker为什么不好我不是很清楚。可能marker的蛋白中有些是碱性蛋白，所以不往下跑？

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2楼2013-07-12 11:49:08

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zhangbaocau

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-12 11:49:08
这很正常，native-page没有SDS增加蛋白表面的负电荷，蛋白只有靠自身携带的电性往正极跑，所以速度比较慢，而且条带没有变性胶漂亮。至于marker为什么不好我不是很清楚。可能marker的蛋白中有些是碱性蛋白，所以不往 ...

哦，谢谢，请问Native-PAGE一定要恒流吗？？SDS-PAGE一般是恒压（80V，120V）

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3楼2013-07-12 16:31:27

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