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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教细菌培养基础技术问题，谢谢~~
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lizi0

银虫 (小有名气)

[求助] 请教细菌培养基础技术问题，谢谢~~

各位大侠，我最近刚开始做微生物试验，以前从未做过。我的试验内容比较简单，就是将乳酸杆菌和大肠杆菌纯培养和共培养于加了天然产物的培养液（大概有20多瓶）里培养。
首先我将甘油管冻存的乳酸杆菌，接种于平板上，有较多单菌落。挑取单菌落接种于1ml MRS 液里，现在过了12小时也长得很慢，OD值还不到0.1,？？？
然后我不太清楚以后的发酵试验，我以多少的细菌量加入到天然产物的培养液里。是要涂平板测得菌落数后以1%接种量加入还是 以一定的OD值分别加入到天然产物的培养液。
在此，先谢谢各位大侠了。多多指教啊。。。。
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鸭梨
1楼 2012-07-19 21:29:49
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nancyyazi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励新虫，还是用手机回答的，精神值得鼓励 2012-07-20 00:06:35
首先我怀疑你的菌从甘油管里面拿出来活力不够 再划几次线 其次 我做实验的时候是将单菌落或者斜面挑菌接种到5mL的液体培养基 培养一定的时间 一般是12到16小时制备成种子液 将种子液以1%或者2%的接种量接到产酶发酵培养基里面

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-07-19 23:54:23
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-20 20:53:56
将单菌落在平板上划线再扩培一代，这样菌种既得到了较好的活化，菌量也足够接种了。
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3楼2012-07-20 08:09:37
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lizi0

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nancyyazi at 2012-07-19 23:54:23
首先我怀疑你的菌从甘油管里面拿出来活力不够 再划几次线 其次 我做实验的时候是将单菌落或者斜面挑菌接种到5mL的液体培养基 培养一定的时间 一般是12到16小时制备成种子液 将种子液以1%或者2%的接种量接到产酶发酵 ...

搞错了。我昨天测得是6.5小时时的OD值才0.06.然后12小时左右已经1.2了。做了好几次。结果波动都很大。请问一般在什么仪器上检测。用酶标仪可以么。测定波长如果是570，或者630会影响大么？
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鸭梨
4楼2012-07-20 16:26:56
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-20 20:54:03
测定菌量的OD值是有影响的。最好是用分光光度计测，酶标仪测得结果之间会有几倍的关系。每次培养一定时间OD相差大是因为你接种时菌的状态不同，可能是对数期，可能是稳定期，所以这个很正常。
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5楼2012-07-20 17:11:52
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lizi0

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-20 17:11:52
测定菌量的OD值是有影响的。最好是用分光光度计测，酶标仪测得结果之间会有几倍的关系。每次培养一定时间OD相差大是因为你接种时菌的状态不同，可能是对数期，可能是稳定期，所以这个很正常。

我是前几天划线平板。涨起来后就放在4度冰箱里。一次分别挑两个菌落到两个EP馆里去培养测0D值。分别弄了三次。值相对变小。是因为在冰箱放着的菌活力下降的缘故么？还有请问，挑单菌落到1ml的培养液里或10ml的培养液里，他们对数生长期的时间都是一样的么。那到对数生长期时他们的OD值应该不一样把。1ml的应该更浑浊吧。是这样么。万分感谢
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鸭梨
6楼2012-07-20 19:45:31
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zliaoyuan

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
EP管里面培养，肯定长的OD低了
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7楼2012-07-22 00:11:49
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张小宇

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nancyyazi at 2012-07-19 23:54:23
首先我怀疑你的菌从甘油管里面拿出来活力不够 再划几次线 其次 我做实验的时候是将单菌落或者斜面挑菌接种到5mL的液体培养基 培养一定的时间 一般是12到16小时制备成种子液 将种子液以1%或者2%的接种量接到产酶发酵 ...

你好，请问你说的这个液体培养基和产酶发酵培养基的成分有什么不同么
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8楼2012-09-10 11:15:29
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