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Native-PAGE的考马斯亮蓝染色
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王之御魂
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Native-PAGE的考马斯亮蓝染色
小弟最近在做漆酶的Native-PAGE染色,我是用愈创木酚进行染色,但是染不出Marker条带,老板说可以用考马斯亮蓝染色,但试过一次连原来的条带都染不出了(可能是我配的考马斯亮蓝染色液成分不对),想请教下前辈们Native-PAGE用的考马斯亮蓝染色液配方是什么,大概要染色多久,脱色时用什么试剂等
在这先谢了
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1楼
2013-06-08 09:38:00
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cicelyzh
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2013-06-08 15:17:13
王之御魂(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。
2013-06-10 13:34:26
用普通的考染方法就可以了。native-page只是电泳条件是非变性的,和染蛋白没有关系。
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2楼
2013-06-08 12:31:35
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王之御魂
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2楼
:
Originally posted by
cicelyzh
at 2013-06-08 12:31:35
用普通的考染方法就可以了。native-page只是电泳条件是非变性的,和染蛋白没有关系。
但是我用SDS-PAGE用的考马斯亮蓝染色液染不出条带,大概是什么问题啊
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3楼
2013-06-08 13:08:00
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cicelyzh
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2013-06-09 08:23:15
王之御魂(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。
2013-06-10 13:34:40
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3楼
:
Originally posted by
王之御魂
at 2013-06-08 13:08:00
但是我用SDS-PAGE用的考马斯亮蓝染色液染不出条带,大概是什么问题啊...
上样量够不够?native-page对分离蛋白的pI有些局限,可能需要上样量大一点。你可以试试保留浓缩胶一起染色,看样品是不是还残留在点样孔和浓缩胶里。
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4楼
2013-06-08 23:55:16
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江户川哀
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流
2013-06-18 21:23:23
王之御魂: 金币+8,
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很有帮助
2013-06-19 09:18:39
我之前做Native的时候就是用普通的考马斯亮蓝染色 ,可以染出来。
染色液的配制(1000ml):
甲醇或者乙醇 500ml
乙酸 100ml
考马斯亮蓝R250 2.5g,
去离子水补至1000ml。
脱色液(1000ml):
甲醇或者乙醇 250ml
乙酸 80ml
去离子水补至1000ml,混匀,备用。
染个半个小时就差不多了
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5楼
2013-06-18 20:26:41
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heipisiyan
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楼主,你也做漆酶吗?我做的是微生物的胞内漆酶,能否请教一下你,胞内漆酶的提取方法……
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6楼
2014-07-23 16:04:43
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王之御魂
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6楼
:
Originally posted by
heipisiyan
at 2014-07-23 16:04:43
楼主,你也做漆酶吗?我做的是微生物的胞内漆酶,能否请教一下你,胞内漆酶的提取方法……
我以前是做胞外的,可能帮不到你了
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7楼
2014-07-24 12:56:48
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