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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Native-PAGE的考马斯亮蓝染色
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王之御魂

木虫 (小有名气)

[求助] Native-PAGE的考马斯亮蓝染色

小弟最近在做漆酶的Native-PAGE染色，我是用愈创木酚进行染色，但是染不出Marker条带，老板说可以用考马斯亮蓝染色，但试过一次连原来的条带都染不出了（可能是我配的考马斯亮蓝染色液成分不对），想请教下前辈们Native-PAGE用的考马斯亮蓝染色液配方是什么，大概要染色多久，脱色时用什么试剂等在这先谢了
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1楼 2013-06-08 09:38:00
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江户川哀

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-18 21:23:23
王之御魂: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-06-19 09:18:39
我之前做Native的时候就是用普通的考马斯亮蓝染色 ，可以染出来。
染色液的配制（1000ml）:
甲醇或者乙醇 500ml
乙酸 100ml
考马斯亮蓝R250 2.5g，
去离子水补至1000ml。

脱色液（1000ml）:
甲醇或者乙醇 250ml
乙酸 80ml
去离子水补至1000ml,混匀，备用。

染个半个小时就差不多了
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5楼2013-06-18 20:26:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王之御魂: 金币+2, ★有帮助 2013-06-08 15:17:13
王之御魂(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-10 13:34:26
用普通的考染方法就可以了。native-page只是电泳条件是非变性的，和染蛋白没有关系。
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2楼2013-06-08 12:31:35
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王之御魂

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-08 12:31:35
用普通的考染方法就可以了。native-page只是电泳条件是非变性的，和染蛋白没有关系。

但是我用SDS-PAGE用的考马斯亮蓝染色液染不出条带，大概是什么问题啊
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3楼2013-06-08 13:08:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
王之御魂: 金币+8, ★有帮助 2013-06-09 08:23:15
王之御魂(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-10 13:34:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王之御魂 at 2013-06-08 13:08:00
但是我用SDS-PAGE用的考马斯亮蓝染色液染不出条带，大概是什么问题啊...

上样量够不够？native-page对分离蛋白的pI有些局限，可能需要上样量大一点。你可以试试保留浓缩胶一起染色，看样品是不是还残留在点样孔和浓缩胶里。
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4楼2013-06-08 23:55:16
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