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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Native-PAGE的考马斯亮蓝染色
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王之御魂

木虫 (小有名气)

[求助] Native-PAGE的考马斯亮蓝染色

小弟最近在做漆酶的Native-PAGE染色，我是用愈创木酚进行染色，但是染不出Marker条带，老板说可以用考马斯亮蓝染色，但试过一次连原来的条带都染不出了（可能是我配的考马斯亮蓝染色液成分不对），想请教下前辈们Native-PAGE用的考马斯亮蓝染色液配方是什么，大概要染色多久，脱色时用什么试剂等在这先谢了
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1楼 2013-06-08 09:38:00
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王之御魂

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by heipisiyan at 2014-07-23 16:04:43
楼主，你也做漆酶吗？我做的是微生物的胞内漆酶，能否请教一下你，胞内漆酶的提取方法……

我以前是做胞外的，可能帮不到你了

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-07-24 12:56:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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王之御魂: 金币+2, ★有帮助 2013-06-08 15:17:13
王之御魂(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-10 13:34:26
用普通的考染方法就可以了。native-page只是电泳条件是非变性的，和染蛋白没有关系。
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2楼2013-06-08 12:31:35
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王之御魂

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-08 12:31:35
用普通的考染方法就可以了。native-page只是电泳条件是非变性的，和染蛋白没有关系。

但是我用SDS-PAGE用的考马斯亮蓝染色液染不出条带，大概是什么问题啊
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3楼2013-06-08 13:08:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
王之御魂: 金币+8, ★有帮助 2013-06-09 08:23:15
王之御魂(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-10 13:34:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王之御魂 at 2013-06-08 13:08:00
但是我用SDS-PAGE用的考马斯亮蓝染色液染不出条带，大概是什么问题啊...

上样量够不够？native-page对分离蛋白的pI有些局限，可能需要上样量大一点。你可以试试保留浓缩胶一起染色，看样品是不是还残留在点样孔和浓缩胶里。
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4楼2013-06-08 23:55:16
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