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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

[求助] native-page活性染色 已有3人参与

最近在做native-page活性染色,蛋白为木聚糖酶,理论上染色脱色后目的条带处应为无色且为单一条带,胶的其余部分应为红色。但是我做出来的结果是从点样孔到胶的三分之一处是无色的,而不是一条单一的条带,感觉目的蛋白是边跑边反应。(跑胶时是在冰浴中进行的)请问有没有这种边跑边反应的可能性啊?如何避免这种情况?
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严以律已,宽以待人
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weishen2

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我感觉这样的结果已经可以用了。如果楼主非要追求完美的话,楼主可以尝试多跑一段时间,或者把浓缩胶ph换成8.8,或者用10%的胶。
另外请教楼主native胶大概要跑多长时间,楼主蛋白的等电点是多少,蛋白是否有CBM结构域。因为我最近也在跑native胶,但是目的条带一直跑不出来。希望楼主给些参考!
10楼2014-01-07 18:41:52
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weishen2

银虫 (小有名气)

顶一下!我最近也打算做native-page,但是不知道从何入手,希望楼主传授下经验。
2楼2014-01-04 10:23:20
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lyt26802

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-01-05 16:17:09
是不是酶的活性太大了 它走过的地方都显示成无色了
3楼2014-01-04 21:48:28
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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lyt26802 at 2014-01-04 21:48:28
是不是酶的活性太大了 它走过的地方都显示成无色了

如果是这样的话,是不是把酶液稀释了会好些啊?
严以律已,宽以待人
4楼2014-01-05 13:47:20
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